Perbedaan Kunci – Halaman SDS vs Western Blot
Western blotting adalah teknik yang mendeteksi protein tertentu dari sampel protein. Teknik ini dilakukan melalui beberapa langkah kunci: elektroforesis gel, blotting, dan hibridisasi. Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS Page) adalah salah satu teknik elektroforesis gel yang digunakan untuk memisahkan protein menurut ukurannya (berat molekul). Western blot adalah lembaran khusus dari membran blotting yang digunakan untuk mentransfer pola protein yang sama di halaman SDS. Perbedaan utama antara SDS Page dan western blot adalah bahwa SDS Page memungkinkan pemisahan protein dalam campuran sementara western blot memungkinkan deteksi dan kuantifikasi protein tertentu dari campuran. Keduanya berguna dalam studi analisis protein.
Apa itu Halaman SDS?
Halaman SDS adalah teknik elektroforesis gel yang digunakan untuk pemisahan protein. Hal ini umumnya digunakan dalam biokimia, genetika, forensik dan biologi molekuler. Setelah protein diekstraksi dari sampel, mereka dijalankan pada gel yang terbuat dari SDS dan poliakrilamida. SDS adalah deterjen anionik yang digunakan untuk melinierkan protein (mendenaturasi protein) dan memberikan muatan negatif pada protein yang dilinierkan sebanding dengan massa molekulnya. Polyacrylamide menjadi pendukung padat untuk gel. Protein terdenaturasi yang bermuatan negatif bermigrasi ke arah ujung positif peralatan melalui gel. Menurut ukuran protein, kecepatan migrasi berbeda antara protein dan pemisahan terjadi. Oleh karena itu, halaman SDS berguna untuk pemisahan protein individu berdasarkan ukurannya.
Persiapan gel poliakrilamida untuk fraksinasi protein merupakan langkah penting di Halaman SDS. Konsentrasi poliakrilamida yang benar dan jenis zat pengikat silang yang digunakan sangat mempengaruhi sifat fisik gel, yang membuat pemisahan sebenarnya dari protein yang berbeda. Ukuran pori gel harus dikelola dengan baik untuk pemisahan yang efektif. Namun, Halaman SDS dianggap sebagai teknik pemisahan protein resolusi tinggi.
Teknik halaman SDS memiliki keterbatasan utama dalam analisis protein. Karena SDS mendenaturasi protein sebelum pemisahan, SDS tidak memungkinkan deteksi aktivitas enzimatik, interaksi pengikatan protein, kofaktor protein, dll.
Gambar 01: Halaman SDS
Apa itu Western Blot?
Teknik western blotting memungkinkan pendeteksian protein spesifik dari campuran protein dan pengukuran kuantitas dan berat molekul protein. Western blot adalah membran yang digunakan selama prosedur blotting untuk mendapatkan bayangan cermin dari pola protein dalam gel SDS-poliakrilamida. Membran yang digunakan untuk western blotting sebagian besar terbuat dari nitroselulosa atau polivinilidena difluorida (PVDF). Membran dengan protein yang ditransfer dapat digunakan untuk mengidentifikasi protein yang diinginkan. Ini membutuhkan antibodi berkualitas tinggi untuk mendeteksi protein yang diinginkan dengan hibridisasi. Antibodi mengikat antigen spesifiknya dan menunjukkan adanya antigen yang diinginkan yaitu protein.
Pemindahan protein dari gel poliakrilamida SDS ke western blot dilakukan dengan elektroblotting. Ini adalah metode yang efektif dan cepat yang menyebabkan protein terelektroforesis keluar dari gel dan melewati membran nitroselulosa (western blot).
Gambar 02: Western Blot
Apa perbedaan antara Halaman SDS dan Western Blot?
Halaman SDS vs Western Blot |
|
| SDS Page adalah teknik elektroforesis gel. | Western blot adalah teknik yang dilakukan pada membran untuk mendeteksi protein tertentu dari suatu campuran. |
| Gunakan | |
| Halaman SDS memungkinkan pemisahan protein menurut ukurannya. | Western blot memungkinkan transfer protein pada gel halaman SDS tanpa mengubah polanya & memungkinkan hibridisasi dengan antibodi spesifik. |
| Kekurangan | |
| Denaturasi protein, biaya tinggi, dan adanya bahan kimia neurotoksin adalah kelemahan dari teknik ini. | Teknik ini memakan waktu dan membutuhkan pengalaman pribadi yang baik dan kondisi terkontrol yang spesifik. |
Ringkasan – Halaman SDS vs Western Blot
Halaman SDS dan western blot adalah dua metode yang terlibat dalam analisis protein. SDS Page memungkinkan pemisahan protein dengan mudah pada gel sesuai dengan berat molekulnya. Western blot membantu mengkonfirmasi keberadaan dan kuantitas protein tertentu melalui hibridisasi dengan antibodi spesifik. Inilah perbedaan antara Halaman SDS dan western blot.
