Perbedaan Kunci – Forward vs Reverse Primer
Polymerase chain reaction (PCR) adalah metode amplifikasi DNA yang digunakan dalam aplikasi Biologi Molekuler. Ini adalah teknik yang umum digunakan yang membuat jutaan hingga miliaran salinan dari urutan DNA yang sangat tertarik. Ini adalah metode in vitro yang dilakukan di laboratorium. Teknik PCR sepenuhnya bergantung pada DNA polimerase yang diproduksi secara komersial yang disebut Taq polimerase. Dan juga membutuhkan beberapa komponen lain dan perawatan suhu yang tepat. Salah satu komponen penting adalah primer. Primer adalah sekuens DNA pendek yang dirancang khusus untuk sekuens DNA target. Panjangnya biasanya sekitar 20 nukleotida. Taq polimerase mengkatalisis penambahan nukleotida ke dalam urutan nukleotida yang sudah ada sebelumnya. Oleh karena itu, primer berfungsi sebagai titik awal sintesis untaian baru. Taq polimerase hanya bekerja pada arah 5’ hingga 3’ sehingga sintesis DNA terjadi pada arah 5’ hingga 3’ yang sama. Karena DNA beruntai ganda, dua jenis primer diperlukan dalam PCR. Mereka dikenal sebagai primer maju dan primer terbalik. Forward dan reverse primer diistilahkan berdasarkan arah pemanjangan primer pada DNA saat sintesis DNA terjadi. Meneruskan anil primer dengan untai DNA antisense dan memulai sintesis untai +ve gen ke arah 5' ke 3'. Membalikkan anil primer dengan untai indra dan memulai sintesis untai komplementer dari untai pengkode; yaitu –ve untai gen ke arah 5'ke 3'. Inilah perbedaan utama antara primer maju dan mundur.
Apa itu Forward Primer?
Orientasi ke depan adalah sintesis untai pengkode atau untai indra gen. Taq polimerase mengkatalisis sintesis untai baru dalam arah 5 'ke 3'. Sintesis coding strand terjadi ketika primer menyatu dengan noncoding atau untai antisense dan memanjang dari arah 5’ ke 3’.
Gambar 01: Primer Maju dan Terbalik
Primer yang menyatu dengan untai antisense atau untai noncoding atau untai template dikenal sebagai primer maju karena primer maju bertindak sebagai titik awal untuk sintesis pengkodean atau untai positif gen. Primer maju memiliki urutan nukleotida pendek yang melengkapi ujung 3’ yang mengapit untai antisense. Ini berhibridisasi dengan untai antisense dan memfasilitasi Taq polimerase untuk menambahkan nukleotida yang melengkapi untai template.
Apa itu Reverse Primer?
Reverse primer adalah sekuens DNA pendek yang menyatu dengan ujung 3’ dari sense strand atau coding strand. Reverse primer berfungsi sebagai titik awal untuk mensintesis untai komplementer dari urutan pengkodean atau urutan noncoding. Reverse primer dirancang untuk melengkapi ujung 3 'dari untai pengkodean. Oleh karena itu, ia menyatu dengan ujung 3' yang mengapit dari untai pengkodean dan memungkinkan Taq polimerase untuk mensintesis untai antisense atau untai templat. Karena orientasinya terbalik, primer ini diberi label sebagai primer terbalik.
Baik primer mundur dan maju penting untuk produksi jutaan hingga miliaran salinan daerah tertentu DNA yang ditargetkan atau tertarik.
Apa Persamaan Forward dan Reverse Primer?
- Primer Forward dan Reverse keduanya terbuat dari oligonukleotida.
- Baik Forward dan Reverse Primers memiliki urutan nukleotida pendek yang melengkapi ujung mengapit untai ganda DNA.
- Primer Forward dan Reverse biasanya terdiri dari 20 nukleotida.
- Baik Forward dan Reverse Primer digunakan dalam reaksi berantai polimerase.
- Baik Forward dan Reverse Primers disintesis secara komersial.
- Primer Forward dan Reverse keduanya stabil pada suhu dan biasanya memiliki Tm yang sama.
- Baik Forward dan Reverse Primer dianil dengan sekuens DNA target.
- Baik Forward dan Reverse Primer dirancang sesuai dengan reaksi PCR.
- Baik Forward dan Reverse Primers berfungsi sebagai titik awal untuk amplifikasi DNA.
- Baik primer mundur dan maju penting untuk produksi jutaan salinan daerah tertentu dari sekuens DNA yang ditargetkan atau tertarik.
Apa Perbedaan Forward dan Reverse Primer?
Forward Primer vs Reverse Primer |
|
| Forward primer adalah sekuens DNA pendek yang berhibridisasi dengan ujung 3’ dari noncoding atau untai cetakan gen dan berfungsi sebagai titik awal untuk mensintesis sekuens pengkode. | Primer terbalik adalah sekuens DNA pendek yang berhibridisasi dengan ujung 3’ pengkode atau untai nontemplat dan berfungsi sebagai titik awal untuk mensintesis sekuens nonkode. |
| Annealing Strand | |
| Forward primer anneals dengan template strand. | Membalikkan anil primer dengan untaian nontemplate. |
| Menghasilkan Urutan Baru | |
| Forward primer memfasilitasi sintesis urutan pengkodean. | Reverse primer memfasilitasi sintesis urutan noncoding. |
Ringkasan – Forward vs Reverse Primer
Ada dua jenis primer yang terlibat dalam teknik PCR. Mereka adalah primer maju dan mundur. Berdasarkan pemanjangan primer dalam sintesis untai DNA baru, primer ini diberi label atau diberi nama. Taq polimerase mensintesis DNA baru dalam orientasi 5 'ke 3'. Oleh karena itu, primer dirancang sebagai pelengkap ujung 3 'dari untaian ganda. Primer maju yang memanjang dalam arah 5 'ke 3' berhibridisasi dengan ujung 3 'antisense atau template atau urutan noncoding. Ini berfungsi sebagai titik awal untuk mensintesis urutan pengkodean. Primer terbalik yang memanjang dalam arah 5 'ke 3' berhibridisasi dengan ujung 3' pengkodean atau nontemplate atau untai indera. Ini berfungsi sebagai titik awal untuk mensintesis urutan noncoding. Inilah perbedaan antara forward dan reverse primer.
