Perbedaan utama antara fase balik dan HPLC fase normal adalah bahwa HPLC fase terbalik menggunakan fase diam nonpolar dan fase gerak polar sedangkan HPLC fase normal menggunakan fase diam polar dan fase gerak yang kurang polar.
HPLC fase normal adalah teknik HPLC tertua yang digunakan Tswett dalam pemisahan ekstrak tumbuhan; dia menggunakan kapur di kolom kaca. Ini adalah mode klasik kromatografi yang menyebabkan penamaan sebagai teknik "normal". HPLC fase terbalik, di sisi lain, adalah kebalikan dari teknik normal, yang dikembangkan para ilmuwan akhir-akhir ini.
Apa itu HPLC Fase Terbalik?
Fase terbalik HPLC adalah teknik kromatografi di mana kami menggunakan fase diam hidrofobik. Di antara semua metode HPLC, kami menggunakan metode ini sekitar 70% karena penerapannya yang luas, dan reproduktifitas. Fase diam bersifat nonpolar dan fase gerak bersifat polar.
Sering kali, para ilmuwan menggunakan campuran air dengan pelarut organik polar yang larut, seperti asetonitril atau metanol sebagai fase gerak. Oleh karena itu, analit berinteraksi dengan fase diam nonpolar.
Apa itu HPLC Fase Normal?
Fase normal HPLC adalah teknik kromatografi di mana kami menggunakan fase diam hidrofilik. Ini adalah metode tradisional HPLC, meskipun kami tidak banyak menggunakannya. Fase diam bersifat polar, dan fase gerak bersifat nonpolar. Lebih penting lagi, fase gerak dari teknik ini adalah 100% organik. Artinya tidak ada air yang digunakan untuk ini.
Gambar 01: Profil sampel untuk kromatogram HPLC fase normal dan fase terbalik menurut polaritas komponen dalam analit.
Biasanya, fase diam mengandung silika, siano, diol, fase ikatan amino, dll. Fase gerak mencakup pelarut organik seperti heksana, etil asetat, dll. Teknik ini didasarkan pada retensi molekul pelarut atau analit ke fase diam polar.
Apa Perbedaan Antara Fase Balik dan Fase Normal HPLC?
Fase terbalik HPLC adalah teknik kromatografi di mana kami menggunakan fase diam hidrofobik. Fase diam dari teknik ini adalah nonpolar sedangkan fase geraknya bersifat polar. Selain itu, para ilmuwan menggunakan campuran air air dengan pelarut organik polar yang dapat larut, seperti asetonitril atau metanol sebagai fase gerak dalam HPLC fase terbalik. Sebaliknya, HPLC fase normal adalah teknik kromatografi di mana kami menggunakan fase diam hidrofilik. Fase diam dari teknik ini bersifat polar sedangkan fase geraknya bersifat nonpolar. Selain itu, para ilmuwan menggunakan pelarut organik seperti heksana, etil asetat, dll sebagai fase gerak HPLC fase normal. Infografis di bawah ini menyajikan perbedaan antara HPLC fase terbalik dan fase normal dalam bentuk tabel.
Ringkasan – Fase Terbalik vs Fase Normal HPLC
Teknik HPLC fase terbalik dan fase normal adalah dua teknik kromatografi cair. Perbedaan utama antara fase balik dan HPLC fase normal adalah bahwa HPLC fase terbalik menggunakan fase diam nonpolar dan fase gerak polar sedangkan HPLC fase normal menggunakan fase diam polar dan fase gerak yang kurang polar.
