Perbedaan utama antara GFP dan EGFP adalah bahwa GFP adalah protein tipe liar yang tergabung dalam kloning molekuler sel non-mamalia sedangkan EGFP adalah tipe GFP yang ditingkatkan atau direkayasa yang dapat digunakan pada sel mamalia.
Kloning molekuler adalah teknik canggih yang banyak digunakan para ilmuwan dalam mengekspresikan protein melalui teknologi rekombinan. Dalam teknologi DNA rekombinan, diperlukan keberhasilan transformasi vektor rekombinan menjadi organisme inang. Oleh karena itu, selama proses transformasi, harus diidentifikasi dan dikonfirmasi apakah gen yang diinginkan telah ditransformasikan atau tidak ke inang. Untuk menilai ini, ahli biologi molekuler mengadopsi beberapa teknik. Dari teknik tersebut, salah satunya adalah gen reporter. Gen reporter ini bertindak sebagai penanda yang dapat dipilih untuk memilih transforman yang benar. Dengan demikian, Green Fluorescent Protein (GFP) dan Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) adalah dua protein reporter yang digunakan dalam kloning molekuler.
Apa itu GFP?
GFP adalah protein tipe liar yang mengandung 238 residu asam amino dan beberapa daerah rangkaian asam amino yang dapat dipilih yang membedakannya dari protein fluoresen lainnya. Selanjutnya, protein tipe liar ini awalnya diisolasi dari Aequorea Victoria; sejenis ubur-ubur. Namun, dalam fenomena alam, ubur-ubur mampu menghasilkan fluoresensi warna hijau sebagai respons terhadap rangsangan tertentu.
Sebelumnya, konsep ini mengejutkan para ilmuwan, dan mereka memutuskan untuk menggunakannya pada teknologi DNA rekombinan mereka. Akibatnya, para ilmuwan menggunakan bentuk mutan dari gen tipe liar ini sebagai gen reporter dalam studi ekspresi gen mereka. Gen tipe liar GFP mampu menghasilkan protein yang memberikan fluoresensi pada suhu kamar atau di bawah sinar UV. Oleh karena itu, ketika dimasukkan ke dalam transforman, ia mengekspresikan dan menghasilkan fluoresensi. Jika hasil fluoresensi setelah proses transformasi, itu menegaskan keberhasilan proses transformasi. Dengan kata sederhana, emisi fluoresensi menandakan keberhasilan transformasi vektor yang membawa gen yang diinginkan ke dalam inang.
Gambar 01: GFP
Karena alasan ini, GFP bertindak sebagai penanda ekspresi gen in vivo. Saat ini, teknik rekayasa genetika digunakan untuk menghasilkan GFP. Selain itu, tersedia banyak versi GFP yang disempurnakan seperti EGFP. Oleh karena itu, ini memungkinkan penggunaan GFP secara efisien dalam kloning molekuler dan studi ekspresi gen.
Apa itu EGFP?
Enhanced Green Fluorescent Protein atau EGFP adalah versi GFP yang disempurnakan. Dengan kata sederhana, kita dapat mendefinisikan EGFP sebagai versi rekayasa dari GFP tipe liar. Ketika gen tipe liar dari GFP bermutasi, itu menghasilkan efek yang menguntungkan. Oleh karena itu, gen GFP yang bermutasi memungkinkan ekspresi karakter baru, dan sebagai hasilnya, kami dapat menghasilkan Enhanced GFP dengan karakteristik yang ditingkatkan. Selanjutnya, kami dapat memperkenalkan mutasi dengan sukses ke gen GFP tipe liar menggunakan metode iradiasi atau kimia. Gen yang bermutasi ini kemudian menghasilkan EGFP, yang memiliki karakteristik lebih menguntungkan.
Gambar 02: EGFP
Perbaikan karakteristik EGFP adalah sebagai berikut;
- Mampu memancarkan sinyal fluoresensi yang lebih kuat.
- Memiliki sensitivitas tinggi.
- Dapat digunakan pada sel mamalia sebagai pengganti prokariota dan eukariota tingkat rendah lainnya.
- Juga, memberikan peningkatan kemurnian produk.
Oleh karena itu, dibandingkan dengan GFP, EGFP adalah pilihan yang lebih disukai untuk studi ekspresi gen. Namun, produknya lebih mahal dibandingkan dengan GFP.
Apa Persamaan Antara GFP dan EGFP?
- GFP dan EGFP adalah dua protein yang memiliki kemampuan memancarkan warna hijau
- Oleh karena itu, keduanya berfungsi sebagai protein reporter dalam studi ekspresi gen.
- Juga, dimungkinkan untuk mensintesis keduanya menggunakan teknologi DNA rekombinan.
- Selain itu, mudah untuk lebih lanjut bermutasi kedua jenis ini untuk mensintesis bentuk yang lebih baik.
Apa Perbedaan Antara GFP dan EGFP?
Gen reporter adalah gen yang melekat pada gen yang diminati dalam teknologi DNA rekombinan. Ini menandakan keberhasilan transformasi vektor rekombinan ke inang. Di sini, GFP dan EGFP adalah dua jenis protein florescent hijau yang berfungsi sebagai protein reporter. Namun, perbedaan utama antara GFP dan EGFP adalah GFP adalah tipe liar sedangkan EGFP adalah versi GFP yang direkayasa. Selanjutnya, EGFP memiliki karakteristik yang lebih menguntungkan daripada GFP. Misalnya, EGFP menghasilkan cahaya fluoresen yang lebih kuat dan lebih sensitif daripada GFP. Perbedaan lain antara GFP dan EGFP adalah sistem di mana kita dapat menggunakannya. Sistem non-mamalia menggunakan GFP sedangkan sistem mamalia menggunakan EGFP.
Infografik di bawah ini menyajikan perbedaan antara GFP dan EGFP dalam bentuk tabel.
Ringkasan – GFP vs EGFP
GFP dan EGFP adalah protein reporter dalam kloning molekuler dan studi ekspresi gen. GFP adalah protein tipe liar, yang merupakan protein fluoresen hijau. Protein awalnya diisolasi dari ubur-ubur Aequorea victoria. Sebaliknya, EFGP adalah bentuk protein GFP yang disempurnakan. Ini adalah mutan dari tipe liar dengan karakteristik yang ditingkatkan. Oleh karena itu, EFGP memiliki kekuatan sinyal yang lebih tinggi dan sensitivitas yang lebih tinggi. Oleh karena itu, kita dapat menggunakannya pada vektor mamalia. Sebaliknya, penggunaan GFP terutama hanya pada vektor non-mamalia. Secara keseluruhan, inilah perbedaan antara GFP dan EGFP.
