Perbedaan Kunci – Tripsinisasi Hangat vs Dingin
Tripsinisasi Hangat dan Dingin adalah dua metode yang digunakan dalam disagregasi enzimatik sel dalam kultur sel hewan. Perbedaan utama antara trypsinization hangat dan dingin, seperti namanya, tergantung pada suhu di mana trypsin ditambahkan untuk disagregasi seluler. Tripsinisasi hangat terjadi pada kondisi suhu yang lebih tinggi (36,5 – 37 0C) sedangkan tripsinisasi dingin terjadi pada kondisi suhu rendah.
Selama proses kultur sel primer sel hewan, ada tiga metode utama yang digunakan dan terbukti berhasil. Tiga metode tersebut meliputi disagregasi mekanis sel, disagregasi enzimatik sel, dan teknik eksplan primer. Disagregasi sel secara enzimatik menyebabkan isolasi sel dan dilakukan oleh enzim pendegradasi protein tripsin. Oleh karena itu, proses ini dikenal sebagai Tripsinisasi. Tripsinisasi dapat dilakukan dalam dua kondisi yang berbeda yaitu Tripsinisasi Hangat dan Tripsinisasi Dingin. Tripsinisasi hangat adalah metode perawatan sel dengan tripsin dalam kondisi hangat pada suhu 36,5 – 37 0C. Tripsinisasi dingin adalah proses perlakuan tripsin yang berlangsung dalam kondisi yang lebih dingin lebih disukai di es yang mempertahankan suhu yang sangat rendah.
Apa itu Tripsinisasi Hangat?
Trypsinization dapat dilakukan untuk memisahkan komponen seluler untuk mengisolasi sel untuk menghasilkan kultur sel primer. Tripsin adalah enzim pengurai protein, dan campuran enzim yang digunakan dalam tripsinisasi dapat berupa ekstrak kasar atau produk murni. Ekstrak kasar dikatakan lebih efisien dalam lisis protein dan disintegrasi sel karena mengandung enzim degradatif lainnya.
Tripsinisasi hangat adalah metode enzimatik yang paling umum digunakan untuk disagregasi sel yang terjadi pada kondisi suhu yang lebih tinggi. Sebelum perawatan dengan trypsinization, jaringan yang diinginkan dipotong menjadi potongan-potongan kecil. Ini memfasilitasi proses disagregasi yang mudah. Jaringan yang telah dipotong kemudian dicuci dalam media khusus yang dikenal dengan media Dissection Basal S alt.
Setelah langkah pencucian selesai, sel-sel diubah menjadi labu yang berisi enzim aktif, yaitu tripsin. Karena teknik ini menyiratkan protokol tripsinisasi hangat, tripsin ditempatkan pada suhu sekitar 37 0C selama sekitar empat jam.
Gambar 01: Tripsin
Isi dicampur dan diaduk dengan menggunakan metode sentrifugasi untuk kemudahan protokol dan untuk mempercepat proses disagregasi. Setelah waktu yang direkomendasikan tercapai, sel-sel dapat diturunkan dari supernatan. Sel-sel yang berasal dari supernatan kemudian diinkubasi pada suhu dan waktu tertentu.
Apa itu Tripsinisasi Dingin?
Tripsinisasi dingin adalah jenis tripsinisasi lain yang terjadi dalam kondisi dingin. Dalam teknik ini, sel-sel yang dicincang dan dicuci ditempatkan dalam vial di atas es dan kemudian direndam dengan tripsin. Waktu perendaman lebih lama – sekitar 6 – 24 jam.
Setelah prosedur perendaman selesai, tripsin dikeluarkan dari lisat sel, dan potongan jaringan selanjutnya diinkubasi pada suhu 37 0C selama sekitar 20 – 30 menit. Disagregasi sel disebabkan oleh pemipetan berulang dari campuran jaringan. Ini akan memungkinkan sel-sel untuk memisahkan diri dari membran dan datang ke supernatan. Setelah sel berada di supernatan, sel diinkubasi dan ditumbuhkan pada suhu dan periode waktu yang diinginkan.
Metode trypsinization dingin memiliki beberapa keunggulan
- Hasil sel hidup yang lebih tinggi karena kerusakan sel diminimalkan. Kerusakan sel diminimalisir dengan tidak menggunakan langkah sentrifugasi.
- Metode yang sangat nyaman.
- Kurang melelahkan.
Keterbatasan utama metode trypsinization dingin adalah bahwa jumlah besar tidak dapat digunakan dalam satu contoh.
Apa Persamaan Antara Tripsinisasi Hangat dan Dingin?
- Proses Tripsinisasi Hangat dan Dingin menggunakan enzim tripsin untuk disagregasi sel.
- Proses Tripsinisasi Hangat dan Dingin digunakan dalam prosedur kultur sel untuk disagregasi sel.
- Dalam prosedur perawatan Tripsinisasi Hangat dan Dingin, sel-sel diturunkan dari supernatan.
Apa Perbedaan Tripsinisasi Hangat dan Dingin?
Tripsinisasi Hangat vs Dingin |
|
| Tripsinisasi hangat adalah metode merawat sel dengan tripsin dalam kondisi hangat pada suhu 36,5 – 37 0. | Tripsinisasi dingin adalah proses perlakuan tripsin yang berlangsung di bawah kondisi yang lebih dingin, lebih disukai dalam es yang mempertahankan suhu yang sangat rendah. |
| Protokol | |
| Potongan jaringan yang dipotong dipertahankan pada suhu 37 0C terus menerus selama prosedur. | Potongan jaringan yang dipotong awalnya dipertahankan pada suhu sedingin es dan kemudian dipertahankan pada suhu 37 0. |
| Suhu | |
| Tripsinisasi hangat terjadi pada 36,5 – 37 0 | Tripsinisasi dingin terjadi pada suhu sedingin es. |
| Waktu yang Digunakan | |
| Waktu yang dibutuhkan lebih sedikit untuk seluruh proses (sekitar 4 jam) trypsinization hangat. | Waktu yang dibutuhkan lebih lama (sekitar 6 – 24 jam) untuk trypsinization dingin. |
| Hasil Sel yang Layak | |
| Tripsinisasi hangat rendah. | Tingkat trypsinization dingin. |
| Penggunaan Sentrifugasi | |
| Sentrifugasi diperlukan untuk disagregasi sel dalam tripsinisasi hangat. | Sentrifugasi tidak diperlukan dalam trypsinization dingin. |
| Jumlah Jaringan Awal untuk Tripsinisasi | |
| Jaringan dalam jumlah yang lebih besar dapat digunakan dalam tripsinisasi hangat. | Jaringan dalam jumlah yang lebih kecil dapat digunakan dalam trypsinization dingin. |
| Kerusakan Sel | |
| Tinggi karena sentrifugasi dalam tripsinisasi hangat. | Kurang karena trypsinization dingin. |
Ringkasan – Tripsinisasi Hangat vs Dingin
Trypsinization adalah metode menggunakan trypsin enzim pendegradasi protein untuk disagregasi dan persiapan kultur sel primer selama proses kultur sel. Ada dua teknik utama tripsinisasi berdasarkan suhu yang digunakan selama prosedur. Mereka adalah trypsinization hangat dan dingin. Tripsinisasi hangat dilakukan pada suhu 37 0C sedangkan tripsinisasi dingin dilakukan pada kondisi sedingin es. Meskipun trypsinization dingin membutuhkan waktu lebih lama untuk diselesaikan, dikatakan memiliki hasil yang lebih tinggi dari sel-sel yang layak. Hal ini disebabkan oleh fakta bahwa kerusakan sel diminimalkan dalam trypsinization dingin karena tidak menggunakan langkah sentrifugasi yang kuat. Inilah perbedaan antara trypsinization hangat dan dingin.
