Perbedaan Kunci – Membran Nitroselulosa vs Nilon
Blotting adalah teknik penting untuk mendeteksi urutan spesifik DNA, RNA, dan protein dari campurannya dalam biologi molekuler. Ini dilakukan dengan menggunakan membran yang disebut blot. Ada teknik blotting yang berbeda seperti blotting utara, selatan dan barat. Memilih membran yang tepat untuk proses blotting harus dilakukan dengan hati-hati untuk mencegah pengikatan yang tidak spesifik dan deteksi yang salah. Nitroselulosa, nilon, dan PVDF adalah membran yang umum digunakan dalam teknik blotting. Mereka memiliki karakteristik yang berbeda. Perbedaan utama antara membran nitroselulosa dan nilon adalah bahwa membran nitroselulosa memiliki potensi imobilisasi protein tinggi sedangkan membran nilon memiliki potensi imobilisasi asam nukleat yang tinggi. Namun, kedua jenis membran tersebut sering digunakan dalam teknik blotting.
Apa itu Membran Nitroselulosa?
Membran nitroselulosa adalah filter membran yang umum digunakan dalam teknik blotting asam nukleat dan protein. Ini memiliki potensi pengikatan protein yang tinggi. Oleh karena itu, membran nitroselulosa banyak digunakan dalam teknik western blotting. Membran nitroselulosa kompatibel dengan semua teknik hibridisasi dan menunjukkan kapasitas pengikatan yang unggul tanpa gangguan. Membran nitroselulosa secara alami bersifat hidrofilik. Mereka membuat interaksi hidrofilik dengan molekul dan secara efisien melumpuhkan mereka ke membran. Membran nitroselulosa komersial tersedia dalam dua ukuran pori: 0,45 dan 0,2 m.
Gambar 01: Membran nitroselulosa yang digunakan dalam western blotting
Apa itu Membran Nilon?
Membran nilon adalah jenis lain dari membran komersial yang digunakan dalam teknik blotting. Hal ini alternatif digunakan dengan membran nitroselulosa untuk blotting selatan dan utara. Membran nilon ideal untuk blotting selatan daripada nitroselulosa karena afinitasnya yang tinggi untuk mengikat dengan DNA. Karena beberapa fitur unik dari membran nilon, peneliti biasanya menggunakan membran nilon untuk blotting selatan dan utara daripada membran nitroselulosa. Membran nilon juga direkomendasikan untuk stripping dan reprobing, tidak seperti nitroselulosa.
Gambar 02: Membran nilon digunakan untuk blotting selatan
Apa perbedaan antara Membran Nitroselulosa dan Nilon?
Nitroselulosa vs Membran Nilon |
|
| Membran nitroselulosa rapuh. | Membran nilon kurang rapuh. |
| Penanganan | |
| Mereka sulit ditangani. | Mereka mudah ditangani. |
| Reprobing | |
| Membran nitroselulosa yang tidak didukung sulit untuk direprobe. | Reprobing mudah dilakukan dengan membran nilon. |
| Kompatibilitas dengan Berbagai Kondisi Penyimpanan | |
| Membran nitroselulosa memiliki kekuatan yang lebih kecil untuk menahan berbagai kondisi penyimpanan. | Membran nilon merespon lebih kuat terhadap berbagai kondisi penyimpanan. |
| Gunakan | |
| Pembasahan diperlukan. | Prewetting tidak diperlukan untuk membran nilon. |
| Sifat Hidrofilik | |
| Membran nitroselulosa bersifat hidrofilik tetapi kurang hidrofilik dibandingkan membran nilon. | Mereka sangat hidrofilik di alam. |
| Potensi Imobilisasi | |
| Membran nitroselulosa memiliki afinitas yang lebih kecil terhadap asam nukleat. Tetapi memiliki afinitas tinggi terhadap protein. | Membran nilon memiliki potensi ikatan yang tinggi dengan asam nukleat daripada membran nitroselulosa. |
Ringkasan – Membran Nitroselulosa vs Nilon
Membran nitroselulosa dan nilon adalah lembaran khusus yang digunakan dalam teknik blotting untuk mereproduksi pola pita pada gel. Mereka memungkinkan kemungkinan mendeteksi urutan tertentu atau protein dari campuran dengan melumpuhkan mereka pada membran. Setelah molekul bergerak pada membran, dapat digunakan sebagai substrat untuk analisis hibridisasi dengan probe berlabel. Membran nitroselulosa umumnya digunakan untuk deteksi protein dalam teknik western blotting karena afinitas pengikatannya yang tinggi dengan protein. Membran nilon sering digunakan untuk blotting selatan dan utara. Inilah perbedaan antara membran nitroselulosa dan nilon.
