Perbedaan Kunci – Nitroselulosa vs PVDF
Western blotting adalah metode yang memungkinkan deteksi dan kuantifikasi protein spesifik dari sampel protein. Keandalan teknik tergantung pada pemilihan membran yang tepat untuk penyerapan protein dari gel. Ada berbagai jenis membran mikropori. Membran nitroselulosa dan PVDF adalah dua membran yang disukai oleh para peneliti karena atribut khusus mereka dibandingkan jenis membran lainnya. Pemilihan antara nitroselulosa atau PVDF juga merupakan tantangan lain dalam western blotting. Baik nitroselulosa dan PVDF memiliki kapasitas penyerapan protein yang tinggi. Perbedaan utama antara membran nitroselulosa dan PVDF adalah bahwa membran nitroselulosa tidak memiliki kemampuan untuk melepaskan antibodi dan menggunakan kembali membran untuk reprobing antibodi sementara membran PVDF memiliki kemampuan untuk melepaskan dan menggunakan kembali.
Apa itu Nitroselulosa?
Nitroselulosa adalah polimer yang dibuat dengan mengolah selulosa dengan asam nitrat dan digunakan untuk membuat membran mikropori dalam biologi molekuler, terutama untuk teknik blotting seperti blotting selatan, utara dan barat. Ukuran pori membran nitroselulosa berkisar antara 3 hingga 20 m. Membran mikropori nitroselulosa memfasilitasi pendeteksian reaksi imunokimia yang terjadi pada permukaan membran. Oleh karena itu, membran nitroselulosa sering digunakan untuk imobilisasi protein dan deteksi protein spesifik pada western blotting. Membran nitroselulosa juga dapat melumpuhkan glikoprotein dan asam nukleat.
Membran nitroselulosa lebih disukai dalam uji aliran lateral karena beberapa fitur. Membran nitroselulosa menyerap protein pada konsentrasi tinggi. Pelarut yang digunakan untuk membasahi membran tidak mengurangi penyerapan protein membran nitroselulosa. Membran nitroselulosa dapat dengan mudah dipotong menjadi ukuran gel yang diinginkan dan mentransfer protein dari gel ke membran dengan transfer listrik atau kapiler. Nitroselulosa memungkinkan aliran protein yang lebih cepat melalui membran dengan potensi pengikatan yang tinggi. Nitroselulosa menunjukkan peningkatan kekuatan penanganan. Atribut khusus lain dari membran nitroselulosa adalah dapat dengan mudah direkatkan dengan perekat tahan air non-pelarut ke berbagai lapisan plastik.
Gambar 01: Membran nitroselulosa untuk western blotting
Apa itu PVDF?
Polyvinylidene difluoride (PVDF) adalah fluoropolymer yang diproduksi oleh polimerisasi vinylidene difluoride dan memiliki kemampuan imobilisasi protein yang tinggi. Oleh karena itu, membran mikropori yang terbuat dari PVDF digunakan dalam teknik western blotting untuk menganalisis protein spesifik dari campuran protein. Membran PVDF juga dapat digunakan untuk analisis asam amino dan pengurutan protein. Karakteristik paling penting dari membran PVDF dibandingkan membran nitroselulosa adalah dapat dengan mudah dilepaskan dari antibodi dan digunakan kembali untuk pemeriksaan antibodi berikutnya.
Membran PVDF lebih tebal dari membran nitroselulosa; karenanya, lebih tahan terhadap kerusakan selama penggunaan kembali. Membran PVDF sangat hidrofobik. Oleh karena itu, mereka harus direndam dalam metanol atau isopropanol sebelum digunakan.
Apa perbedaan antara Nitroselulosa dan PVDF?
Nitroselulosa vs PVDF |
|
| Nitroselulosa adalah polimer yang tersusun dari selulosa. | PVDF adalah fluoropolimer yang dihasilkan dari polimerisasi vinilidena difluorida. |
| Ukuran Pori Membran | |
| Ukuran pori pada umumnya adalah 0,1, 0,2 atau 0,45μ | Ukuran pori pada umumnya adalah 0,1, 0,2 atau 0,45μm |
| Kapasitas Pengikatan Protein | |
| Nitroselulosa memiliki kapasitas pengikatan protein 80 hingga 100 g/cm2. | PVDF memiliki kapasitas pengikatan protein 170 hingga 200 g/cm2. |
| Sensitivitas | |
| Ini memiliki sensitivitas yang rendah dibandingkan dengan PVDF. | Ini memiliki sensitivitas yang tinggi. |
| Deteksi Protein yang Diekspresikan Rendah | |
| Karena sensitivitasnya rendah pada membran nitroselulosa, maka tidak cocok untuk mendeteksi protein yang diekspresikan rendah. | Ini lebih cocok untuk mendeteksi protein yang diekspresikan rendah karena sensitivitasnya yang tinggi. |
| Suara Latar Belakang | |
| Ini memiliki kebisingan latar belakang yang lebih rendah | Ini memiliki kebisingan latar belakang yang lebih tinggi. |
| Interaksi dengan Protein | |
| Molekul protein berikatan dengan membran nitroselulosa melalui interaksi hidrofobik. | Protein mengikat membran PVDF melalui interaksi hidrofobik dan dipol. |
| Sifat Membran | |
| Nitroselulosa rapuh dan rapuh. Namun, versi nitroselulosa tersedia, dan mereka tahan. | PVDF lebih tahan lama dan memiliki ketahanan kimia yang lebih tinggi. |
| Kemampuan untuk Mengupas dan Menggunakan Kembali | |
| Nitroselulosa mungkin mengalami kesulitan dalam stripping dan reprobing tanpa kehilangan sinyal. | PVDF sangat ideal untuk aplikasi reprobing dan sequencing. |
| Kesesuaian | |
| Nitroselulosa sangat ideal untuk mendeteksi protein dengan berat molekul rendah. | PVDF lebih cocok untuk mendeteksi protein dengan berat molekul lebih tinggi. |
| Kegunaan Lain | |
| Nitroselulosa dapat digunakan untuk analisis asam nukleat dan dot/slot blotting. | PVDF dapat digunakan untuk pengurutan protein dan sistem pengujian fase padat. |
| Biaya | |
| Ini lebih murah daripada membran PVDF. | Ini lebih mahal daripada membran nitroselulosa. |
| Perlu Pra-pembasahan | |
| Membran nitroselulosa tidak perlu direndam terlebih dahulu dengan metanol | Membran PVDF memerlukan perendaman awal dengan metanol. |
Ringkasan – Nitroselulosa vs PVDF
Membran Nitroselulosa adalah membran pertama yang digunakan secara komersial untuk uji aliran lateral. Mereka memiliki kapasitas tinggi untuk menyerap protein. Oleh karena itu, membran nitroselulosa digunakan dalam western blotting. PVDF adalah jenis membran lain yang digunakan dalam western blotting dan juga memiliki kapasitas penyerapan protein yang tinggi. Kedua jenis digunakan dalam western blotting untuk analisis protein. Namun, membran PVDF memiliki atribut yang lebih khusus, membuatnya lebih cocok daripada membran nitroselulosa untuk western blotting. Tapi, membran nitroselulosa lebih cocok untuk mendeteksi protein berbobot molekul rendah, membran PVDF lebih cocok untuk mendeteksi protein berbobot molekul tinggi. Inilah perbedaan antara membran nitroselulosa dan PVDF.
