Perbedaan Kunci – ELISA Langsung vs Tidak Langsung
Enzym-linked immunoassay (ELISA), juga dikenal sebagai enzyme immunoassay, adalah tes serologis yang mendeteksi antibodi dalam darah. Ini digunakan sebagai alat diagnostik untuk mengetahui apakah pasien telah terpapar virus jenis tertentu atau agen infeksi lain (antigen) dan apakah tubuh telah memproduksi antibodi terhadap infeksi tersebut. ELISA juga dapat mengidentifikasi infeksi masa lalu dan saat ini. Oleh karena itu, ELISA sering digunakan sebagai tes pra-penyaringan oleh dokter sebelum analisis penyakit secara mendalam. Tes ini dapat dilakukan di laboratorium dengan mengambil sampel darah dari pasien. Ada dua jenis tes ELISA: ELISA langsung dan ELISA tidak langsung. Perbedaan utama antara ELISA langsung dan tidak langsung adalah bahwa ELISA tidak langsung lebih sensitif dan memerlukan penambahan antibodi sekunder sedangkan ELISA langsung kurang sensitif dan hanya menggunakan antibodi primer.
Apa itu ELISA Langsung?
ELISA adalah tes diagnostik penyakit yang dilakukan untuk mengidentifikasi adanya antigen atau antibodi tertentu dalam darah. Ini dilakukan sebagai uji pelat. Ini menggunakan antibodi yang terkait dengan enzim yang mudah diuji. Kehadiran antigen dalam sampel serum berikatan dengan antibodi spesifik yang terkait dengan enzim. Pada langkah terakhir, substrat spesifik ditambahkan untuk bereaksi dengan enzim. Enzim mengubah substrat menjadi produk berwarna atau penghasil sinyal. Perubahan warna pada substrat kimia menunjukkan adanya antibodi tertentu dalam sampel serum. Tes ELISA langsung hanya menggunakan antibodi primer yang terkait dengan enzim. Setelah mengikat antigen, dengan cepat berubah warna, menunjukkan adanya agen infeksi dalam darah. Namun, intensitas sinyal lebih lemah dalam ELISA langsung karena epitop terbatas pada pengikatan antigen. Oleh karena itu, ELISA langsung kurang sensitif dibandingkan dengan ELISA tidak langsung.
Gambar 01: Tes ELISA Langsung
Apa itu ELISA Tidak Langsung?
ELISA dapat dilakukan dengan menggunakan dua jenis antibodi yaitu; antibodi primer dan antibodi sekunder. Alat ELISA tidak langsung menggunakan kedua jenis antibodi untuk memperkuat sinyal untuk deteksi yang lebih baik. Teknik ELISA tidak langsung dilakukan sebagai berikut.
- Plat diinkubasi dengan antigen dan dicuci untuk memblokir pengikatan nonspesifik.
- Kemudian antibodi primer ditambahkan dan dicuci.
- Antibodi sekunder terkait-enzim ditambahkan dan dicuci.
- Substrat ditambahkan dan dibiarkan bereaksi dengan enzim.
- Sinyal terdeteksi, dan ada atau tidak adanya antigen spesifik dalam sampel diidentifikasi.
Dalam uji ELISA tidak langsung, beberapa antibodi sekunder dapat berikatan dengan satu antibodi primer. Antibodi sekunder dihubungkan dengan enzim yang mudah diuji. Oleh karena itu, satu ikatan dapat membuat sinyal yang kuat karena lebih dari satu interaksi. Oleh karena itu, ELISA tidak langsung lebih sensitif daripada ELISA langsung. Namun, ELISA tidak langsung dapat membuat sinyal nonspesifik karena reaksi silang dari antibodi sekunder.
Gambar 02: Uji ELISA Tidak Langsung
Apa perbedaan antara ELISA Langsung dan Tidak Langsung?
ELISA Langsung vs Tidak Langsung |
|
| ELISA langsung kurang sensitif dibandingkan dengan ELISA tidak langsung. | ELISA tidak langsung lebih sensitif. |
| Waktu yang Dibutuhkan | |
| Tes ELISA langsung adalah proses yang cepat. | ELISA tidak langsung memakan waktu. |
| Penggunaan Antibodi | |
| Hanya satu jenis antibodi (antibodi primer) yang digunakan dalam ELISA langsung. | Antibodi primer dan sekunder digunakan untuk ELISA tidak langsung. |
| Link dengan Enzim | |
| Antibodi primer dihubungkan dengan enzim. | Antibodi sekunder dihubungkan dengan enzim. |
| Reaktivitas Silang dari Antibodi Kedua | |
| ELISA langsung menghilangkan reaktivitas silang antibodi kedua. | ELISA tidak langsung dipengaruhi oleh reaktivitas silang antibodi kedua. |
| Sinyal | |
| Sinyal lemah dibandingkan dengan ELISA tidak langsung. | Sinyal diperkuat dalam ELISA tidak langsung. Oleh karena itu, mudah untuk dideteksi. |
Ringkasan – ELISA Langsung vs Tidak Langsung
ELISA adalah teknik biokimia yang digunakan terutama dalam imunologi untuk mendeteksi keberadaan antibodi atau antigen dalam sampel darah pasien. Ini dapat dilakukan melalui dua proses yang dikenal sebagai ELISA langsung atau tidak langsung. Tes ELISA langsung hanya menggunakan antibodi primer untuk mendeteksi antigen sedangkan ELISA tidak langsung menggunakan antibodi primer dan sekunder. Pada ELISA langsung, antibodi primer diberi label sedangkan pada ELISA tidak langsung, antibodi sekunder diberi label. Inilah perbedaan antara ELISA langsung dan tidak langsung.
