Perbedaan utama antara imunofluoresensi langsung dan tidak langsung adalah bahwa imunofluoresensi langsung menggunakan antibodi tunggal yang bekerja melawan target yang diinginkan sedangkan imunofluoresensi tidak langsung menggunakan dua antibodi untuk melabeli target yang diinginkan.
Immunofluorescence atau pencitraan sel adalah teknik yang digunakan untuk memberi label antigen target spesifik dengan fluorofor. Di sini, fluorofor adalah senyawa kimia fluoresen yang dapat memancarkan kembali cahaya pada eksitasi cahaya. Ketika fluorofor mengikat dengan antigen target, memungkinkan deteksi molekul target dalam sampel. Untuk menggambarkannya lebih lanjut, ketika antigen mengikat dengan antibodi spesifik, itu dapat terkonjugasi dengan fluorofor. Oleh karena itu, mudah untuk mendeteksi keberadaan antigen target dalam sampel saat mengamati di bawah mikroskop fluoresensi.
Selain itu, ada dua jenis imunofluoresensi; imunofluoresensi langsung dan tidak langsung. Perbedaan antara imunofluoresensi langsung dan tidak langsung terutama terletak pada jumlah antibodi yang digunakan dan konjugasi fluorofor. Artinya, dalam imunofluoresensi langsung, fluorofor secara langsung berkonjugasi dengan antibodi primer sedangkan pada imunofluoresensi tidak langsung, fluorofor berkonjugasi dengan antibodi sekunder.
Apa itu Imunofluoresensi Langsung?
Imunofluoresensi menggunakan antibodi untuk mendeteksi antigen target spesifik. Imunofluoresensi langsung adalah salah satu dari dua jenis imunofluoresensi. Dalam imunofluoresensi langsung, antibodi tunggal (antibodi primer) terlibat dan fluorofor secara langsung berkonjugasi dengan antibodi primer. Setelah mengikat antibodi dengan antigen target, fluorofor memancarkan fluoresensi yang dapat dideteksi oleh mikroskop fluoresensi.
Gambar 01: Imunofluoresensi Langsung
Namun, imunofluoresensi langsung adalah metode yang mahal karena antibodi terkonjugasi primer lebih mahal dibandingkan dengan antibodi sekunder. Namun demikian, itu tidak melibatkan langkah tambahan karenanya, teknik yang lebih pendek. Lebih lanjut, ikatan non-spesifik berkurang dalam imunofluoresensi langsung. Oleh karena itu, reaktivitas silang spesies rendah. Tetapi dalam deteksi, sensitivitas imunofluoresensi langsung lemah dibandingkan dengan imunofluoresensi tidak langsung.
Apa itu Imunofluoresensi Tidak Langsung?
Imunofluoresensi tidak langsung adalah jenis kedua dari imunofluoresensi yang melibatkan dua jenis antibodi seperti antibodi primer dan sekunder dalam pelabelan antigen target. Dalam metode ini, fluorofor berkonjugasi dengan antibodi sekunder. Oleh karena itu, teknik ini melibatkan langkah tambahan.
Gambar 02: Imunofluoresensi
Namun, sensitivitasnya tinggi dalam metode ini karena beberapa fluorofor dapat dikonjugasikan ke antibodi sekunder dan membuat deteksi lebih mudah. Selanjutnya, imunofluoresensi tidak langsung lebih murah karena fakta bahwa konjugasi antibodi sekunder lebih murah dan lebih mudah. Dibandingkan dengan imunofluoresensi langsung, reaktivitas silang spesies tinggi dalam metode tidak langsung.
Apa Persamaan Antara Imunofluoresensi Langsung dan Tidak Langsung?
- Mereka adalah dua jenis teknik imunofluoresensi.
- Antibodi primer dan fluorofor terlibat dalam kedua metode.
- Juga, reaksi antigen-antibodi terjadi pada kedua metode.
- Selanjutnya, baik imunofluoresensi langsung maupun tidak langsung menggunakan mikroskop fluoresensi untuk mendeteksi antigen.
Apa Perbedaan Antara Imunofluoresensi Langsung dan Tidak Langsung?
Imunofluoresensi dapat langsung atau tidak langsung berdasarkan konjugasi fluorofor dengan antibodi yang digunakan. Dalam imunofluoresensi langsung, fluorofor berkonjugasi dengan antibodi primer, yang merupakan antibodi tunggal yang terlibat dalam teknik ini. Berbeda dengan itu, dalam imunofluoresensi tidak langsung, fluorofor berkonjugasi dengan antibodi sekunder, yang merupakan salah satu dari dua jenis antibodi yang terlibat dalam teknik ini. Oleh karena itu, perbedaan utama antara imunofluoresensi langsung dan tidak langsung adalah jenis antibodi yang berkonjugasi dengan fluorofor.
Infografik berikut memberikan perbandingan berdampingan perbedaan antara imunofluoresensi langsung dan tidak langsung.
Ringkasan – Imunofluoresensi Langsung vs Tidak Langsung
Immunofluorescence adalah teknik yang digunakan untuk mendeteksi keberadaan antigen spesifik dalam sampel. Teknik ini menggunakan antibodi spesifik. Oleh karena itu, dalam hal ini, antibodi berkonjugasi dengan fluorofor untuk mendeteksinya menggunakan mikroskop fluoresen. Selain itu, ada dua jenis imunofluoresensi yaitu, imunofluoresensi langsung dan tidak langsung. Imunofluoresensi langsung melibatkan antibodi tunggal dan fluorofor yang terkonjugasi langsung ke antibodi ini. Imunofluoresensi tidak langsung melibatkan dua antibodi; primer dan sekunder dan fluorofor terkonjugasi ke antibodi sekunder. Karena beberapa antibodi sekunder dapat berikatan dengan antibodi primer dan beberapa fluorofor dapat berkonjugasi dengan antibodi sekunder, imunofluoresensi tidak langsung merupakan metode yang lebih sensitif daripada metode langsung. Selain itu, metode tidak langsung lebih murah daripada metode langsung. Jadi, inilah perbedaan antara imunofluoresensi langsung dan tidak langsung.
