Perbedaan Kunci – YAC vs M13 Phage Vector
Kloning DNA adalah proses penting yang memungkinkan perbanyakan fragmen DNA penting organisme. Ini membutuhkan penggabungan DNA spesifik dengan DNA vektor untuk membuat DNA rekombinan yang berubah menjadi organisme inang. Vektor adalah molekul DNA yang berperilaku sebagai kendaraan untuk membawa materi genetik asing ke dalam sel atau organisme lain. Itu harus mampu mereplikasi di dalam organisme inang dan menghasilkan banyak salinan DNA rekombinan. Ada berbagai jenis vektor yang digunakan dalam kloning DNA. Kromosom buatan ragi (YAC) dan vektor fag M13 adalah dua jenis di antaranya. Perbedaan utama antara vektor fag YAC dan M13 adalah bahwa YAC adalah kromosom buatan yang bereplikasi dalam sel ragi sedangkan vektor fag M13 adalah DNA sirkular beruntai tunggal dari bakteriofag M13 yang bereplikasi dalam sel E Coli.
Apa itu Vektor YAC?
YAC adalah kromosom buatan yang memiliki kemampuan untuk membawa sebagian besar DNA asing dan bereplikasi di dalam sel ragi. Ia memiliki sentromer, telomer, dan urutan replikasi mandiri yang penting untuk replikasi dan stabilitas. YAC juga harus memiliki penanda selektif atau penanda dan situs restriksi untuk menjadikannya vektor kloning yang efektif. Urutan besar mulai dari 1000 kb hingga 2000 kb dapat dimasukkan ke YAC dan ditransfer ke ragi.
Gambar 01: Vektor YAC
Apa itu M13 Phage Vector?
Bacteriophage M13 adalah virus yang menginfeksi dan bereplikasi di E Coli. Genom bakteriofag M13 berukuran kecil, sekitar 6,7 kb. Ini adalah DNA rasa beruntai tunggal, melingkar dan positif. Virus ini secara khusus menginfeksi bakteri E Coli melalui F pilus. Setelah memasuki ssDNA ke dalam bakteri, ia mensintesis untai komplementernya dan menjadi dsDNA atau bentuk replikatif (RF) dari M13. RF dapat berperilaku seperti plasmid dalam organisme inang. DsDNA bereplikasi dalam E Coli dan menghasilkan ssDNA yang mengandung fag baru. Fag baru ini terus-menerus dilepaskan dari E Coli tanpa membunuh sel inang. Namun, infeksi memperlambat pertumbuhan E Coli. dsDNA dapat diekstraksi dari sel bakteri dan digunakan sebagai vektor dalam kloning DNA. Mereka dikenal sebagai vektor fag M13. Mereka dapat dengan mudah dimanipulasi dan digunakan mirip dengan vektor plasmid.
Kemampuan infeksi yang melekat pada fag M13 ini berfungsi sebagai kualifikasi yang baik untuk digunakan sebagai vektor dalam kloning gen. Saat mengembangkan M13 menjadi vektor, beberapa elemen harus dimasukkan ke dalam genomnya. Mereka adalah, gen untuk protein lac repressor (lac I), wilayah operator-proksimal gen lac Z, promotor lac dan situs kloning ganda (polylinker). Ketika dsDNA dari M13 digunakan sebagai vektor, itu dapat diperlakukan sebagai vektor plasmid. Namun, penggunaan ssDNA M13 memiliki keunggulan dalam pengurutan DNA dan mutagenesis terarah.
Karena vektor fag M13 memiliki banyak situs kloning di wilayah lacZ, vektor yang digabungkan dapat dengan mudah diidentifikasi dengan skrining koloni biru/putih pada pelat agar yang mengandung IPTG dan X-Gal. Plak biru yang dihasilkan di piring tidak mengandung fag rekombinasi. Oleh karena itu, fag dengan sisipan dapat dipilih untuk tujuan kloning.
Gambar 02: Bakteriofag M13
Apa perbedaan antara YAC dan M13 Phage Vector?
YAC vs M13 Phage Vector |
|
| YAC adalah kromosom rekayasa genetika yang memiliki kemampuan untuk membawa sebagian besar DNA asing dan bereplikasi di dalam sel ragi. | M13 vektor fag adalah vektor virus yang dikembangkan oleh bakteriofag M13 yang digunakan untuk memasukkan DNA asing ke dalam E Coli. |
| Tujuan | |
| YAC dirancang untuk mengkloning fragmen besar DNA genom ke dalam ragi. | M13 vektor fag digunakan untuk memasukkan DNA asing ke dalam E Coli. |
| Sisipkan Panjang | |
| YAC dapat berisi sisipan genom berukuran megabase (1000 kb – 2000 kb). | Ukuran insert sekitar 1.500 bps. |
| Konstruksi | |
| YAC DNA sulit dimurnikan secara utuh dan membutuhkan konsentrasi tinggi untuk menghasilkan sistem vektor YAC. | Itu terjadi melalui rantai elektron fotosintesis siklik. |
| Stabilitas | |
| YAC tidak stabil. | Fage M13 dapat dengan mudah diekstraksi. |
| Ukuran | |
| Enzim adalah molekul yang lebih besar. | M13 phages lebih stabil dari YAC. |
Ringkasan – YAC vs M13 Phage Vector
YAC adalah sistem vektor yang dibuat secara artifisial menggunakan wilayah spesifik kromosom ragi untuk menyisipkan segmen besar materi genetik ke sel ragi. Vektor fag M13 merupakan sistem vektor yang berasal dari bakteriofag M 13 yang menggunakan E coli sebagai organisme inangnya. Inilah perbedaan utama antara YAC dan M13 Phage Vector. Keduanya sama-sama berguna dalam teknologi DNA rekombinan dan kloning gen.
