Perbedaan utama antara uji kolorimetri dan fluorometrik adalah bahwa uji kolorimetri menentukan konsentrasi senyawa berwarna dalam larutan sedangkan uji fluorometrik menentukan mekanisme kinetik suatu larutan.
A uji biokimia adalah teknik yang mendeteksi atau mengukur aktivitas molekul atau zat biologis secara analitik. Ini adalah proses in vitro. Uji kolorimetri dan uji fluorometrik adalah dua jenis uji biokimia yang umum dilakukan di laboratorium. Berbagai teknik seperti ELISA dan western blotting juga merupakan uji biokimia kompleks untuk kuantifikasi aktivitas metabolisme dan pengukuran perilaku fungsional biomolekul seperti protein, enzim, dan molekul kecil lainnya. Jenis pengujian ini digunakan untuk identifikasi interaksi protein-DNA, protein-RNA, dan protein-protein.
Apa itu Uji Kolorimetri?
Pengujian kolorimetri adalah teknik yang menentukan konsentrasi senyawa berwarna dalam larutan. Dengan kata lain, uji kolorimetri adalah reaksi yang mengarah pada perubahan warna karena reaksi enzimatik atau kimia antara reagen dan analit. Tes kolorimetri dipraktekkan dalam biokimia untuk menguji enzim, senyawa spesifik, hormon, antibodi dan analit lainnya. Mereka menggunakan kolorimeter atau spektrofotometer. Colorimeters adalah instrumen yang mencirikan sampel berwarna untuk memberikan ukuran obyektif dari karakteristik warna. Spektrofotometer adalah alat yang mengukur intensitas cahaya sebagai fungsi warna atau panjang gelombang cahaya.
Gambar 01: Uji Kolorimetri
Bagaimana Cara Kerja Uji Kolorimetri?
Dalam uji kolorimetri, pelat disiapkan dengan antibodi tertentu yang terikat pada sumur. Kemudian sampel ditambahkan. Ini memungkinkan sampel untuk mengikat antibodi. Kemudian antibodi deteksi dan substrat ditambahkan ke sumur untuk bereaksi dengan probe deteksi. Stop solution ditambahkan di akhir sebelum pembacaan. Sumur kosong yang disebut blanko dibiarkan tanpa sampel. Dalam uji kolorimetri, semakin gelap warnanya, semakin besar konsentrasi analitnya. Biasanya, hanya satu panjang gelombang yang dibutuhkan untuk membaca. Tetapi jika ada pengukuran referensi, digunakan dua atau lebih panjang gelombang.
Apa itu Uji Fluorometrik?
Uji fluorometrik adalah teknik yang menentukan mekanisme kinetik reaksi enzim. Uji fluorometrik terjadi dengan pembentukan produk fluoresen dari substrat nonfluoresen atau sebaliknya. Pengujian ini juga menggunakan transfer energi resonansi fluoresensi (FRET) di mana, reaksi enzimatik mengubah posisi dua fluorofor dalam substrat sehingga mengubah intensitas fluoresensi.
Gambar 02: Uji Fluorometrik
Tes fluorometri umumnya jauh lebih sensitif daripada tes lainnya. Estimasi enzim diagnostik dalam sampel jaringan, sel, atau cairan pasien meningkat karena sensitivitasnya yang lebih tinggi.
Bagaimana Cara Kerja Uji Fluorometrik?
Dalam uji fluorometrik, substrat ditambahkan ke sampel di pelat, dan respons fluoresensi diambil menggunakan pembaca pelat. Di sini, setiap sel diukur secara terpisah. Pelat buram digunakan dalam uji fluorometrik. Ini mengurangi hamburan cahaya. Dua panjang gelombang diperlukan untuk jenis pengujian ini. Satu panjang gelombang untuk mendeteksi eksitasi dan panjang gelombang lainnya untuk emisi.
Apa Persamaan Antara Uji Kolorimetri dan Fluorometrik?
- Uji kolorimetri dan uji fluorometri adalah dua jenis uji biokimia.
- Kedua tes dilakukan untuk diagnosa medis.
- Pengujian ini melibatkan reaksi enzimatik.
- Kedua pengujian melibatkan substrat dan analit.
Apa Perbedaan Antara Uji Kolorimetri dan Fluorometrik?
Uji kolorimetri adalah teknik yang menentukan konsentrasi senyawa berwarna dalam larutan, sedangkan uji fluorometrik adalah teknik yang menentukan mekanisme kinetik reaksi enzim. Jadi, inilah perbedaan utama antara uji kolorimetri dan fluorometrik. Selain itu, uji fluorometrik lebih sensitif daripada uji kolorimetri; dengan demikian, uji fluorometrik memiliki kemampuan untuk mendeteksi lebih banyak analit. Jadi, ini adalah perbedaan penting lainnya antara uji kolorimetri dan fluorometrik. Selanjutnya, uji fluorometrik memerlukan dua panjang gelombang, sedangkan uji kolorimetri dilakukan dengan satu panjang gelombang.
Infografik di bawah ini mentabulasikan lebih banyak perbedaan antara uji kolorimetri dan fluorometrik.
Ringkasan – Uji Kolorimetri vs Fluorometrik
Pemeriksaan biokimia adalah proses analitik yang digunakan untuk menentukan dan mengukur reaksi metabolisme seluler. Uji kolorimetri dan uji fluorometrik adalah dua jenis uji biokimia. Uji kolorimetri adalah reaksi yang mengarah pada perubahan warna karena reaksi enzimatik atau kimia antara reagen dan analit sedangkan uji fluorometrik adalah teknik yang digunakan untuk menentukan mekanisme kinetik reaksi enzim. Kedua pengujian bergantung pada reaksi enzimatik yang melibatkan substrat dan analit. Tes fluorometrik lebih sensitif daripada tes kolorimetri. Yang paling penting, uji fluorometrik membutuhkan dua panjang gelombang, sedangkan uji kolorimetri dapat dilakukan hanya dengan satu panjang gelombang. Jadi, ini merangkum perbedaan antara uji kolorimetri dan fluorometrik.
