Perbedaan utama antara uji BCA dan Bradford adalah bahwa uji BCA memakan waktu dan kurang akurat, sedangkan uji Bradford cepat dan akurat.
BCA dan uji Bradford adalah dua metode pengujian penentuan konsentrasi protein. Kedua pengujian ini memiliki prinsip pengujian yang berbeda dan akurasi yang berbeda.
Apa itu BCA Assay?
BCA assay atau assay asam bicinchoninic adalah uji biokimia yang berguna dalam menentukan konsentrasi total protein dalam suatu larutan. Metode ini juga dinamai Smith assay setelah penemunya, Paul K. Smith. Metode analisis ini menunjukkan kesamaan dengan uji protein Lowry, uji protein Bradford atau reagen biuret. Kita dapat mengamati konsentrasi protein total dalam sampel tertentu melalui perubahan warna larutan sampel, yang berubah dari hijau menjadi ungu. Perubahan warna ini terjadi sebanding dengan kandungan proteinnya. Selanjutnya kita dapat menggunakan teknik kolorimetri untuk menganalisis intensitas warna dan kandungan protein dalam sampel.
Metode Pendugaan Protein BCA
Saat mempertimbangkan mekanisme pengujian BCA, larutan BCA yang khas mengandung larutan yang sangat basa dengan pH hampir sekitar 11,25, dan bahan dalam larutan ini termasuk asam bicinchoninic, natrium karbonat, natrium bikarbonat, natrium tartrat, dan tembaga(II) sulfat pentahidrat. Pengujian ini terutama bergantung pada dua reaksi kimia: reduksi tembaga(II) menjadi tembaga(I) oleh ikatan peptida dalam protein dan khelasi dua molekul asam bicinchoninic dengan ion tembaga(I), menghasilkan kompleks berwarna ungu yang dapat menyerap cahaya pada panjang gelombang 562 nm. Pada reaksi pertama, jumlah tembaga(II) yang direduksi oleh ikatan peptida sebanding dengan jumlah protein dalam sampel.
Apa itu Uji Bradford?
Bradford assay adalah metode analisis spektroskopi yang berguna dalam mengukur konsentrasi protein dalam larutan. Metode ini dikembangkan oleh Marion M. Bradford pada tahun 1976, dan merupakan metode yang relatif cepat dan akurat.
Reaksi Warna Protein dan Pereaksi Bradford
Kita dapat menggunakan metode ini untuk menentukan konsentrasi jumlah protein dalam sampel. Reaksi kimia yang terjadi dalam sampel selama pengujian ini semata-mata bergantung pada komposisi asam amino protein dalam sampel.
Estimasi Protein Metode Bradford
Saat mempertimbangkan metode pengujian ini, ini adalah pengujian protein kolorimetri yang didasarkan pada pergeseran absorbansi pewarna bernama Coomassie Brilliant Blue G-250. Umumnya, pewarna ini ada dalam tiga bentuk sebagai bentuk anionik (biru), bentuk netral (hijau) dan bentuk kationik (merah). Oleh karena itu, dalam kondisi asam, pewarna berubah warna dari merah menjadi biru. Ini karena ikatan protein dengan pewarna. Sebaliknya jika tidak ada protein untuk mengikat zat warna maka tidak terjadi perubahan warna, larutan menjadi berwarna merah-coklat. Zat warna ini mampu membentuk kompleks nonkovalen yang kuat dengan gugus karboksil protein melalui gaya Van der Waal dan gaya tarik elektrostatik.
Apa Perbedaan Antara BCA dan Bradford Assay?
BCA dan uji Bradford adalah dua metode pengujian penentuan konsentrasi protein. Kedua pengujian ini memiliki prinsip pengujian yang berbeda dan akurasi yang berbeda. Perbedaan utama antara uji BCA dan Bradford adalah bahwa uji BCA memakan waktu dan kurang akurat, sedangkan uji Bradford cepat dan akurat.
Infografik berikut merangkum perbedaan antara uji BCA dan Bradford dalam bentuk tabel.
Ringkasan – BCA vs Bradford Assay
BCA assay atau assay asam bicinchoninic adalah uji biokimia yang berguna dalam menentukan konsentrasi total protein dalam suatu larutan. Uji Bradford adalah metode analisis spektroskopi yang berguna dalam mengukur konsentrasi protein dalam suatu larutan. Perbedaan utama antara BCA dan Bradford assay adalah BCA memakan waktu dan kurang akurat, sedangkan Bradford assay cepat dan akurat.
