Perbedaan utama FPLC dan HPLC adalah bahwa FPLC adalah jenis kromatografi cair yang memurnikan biomolekul besar seperti protein, nukleotida, dan peptida, sedangkan HPLC adalah jenis kromatografi cair yang memisahkan senyawa berbobot molekul kecil.
Kromatografi cair adalah teknik yang digunakan untuk memisahkan sampel menjadi komponen-komponen individualnya. Pemisahan ini terjadi karena interaksi sampel tertentu dengan fase gerak dan fase diam. Komponen dalam sampel dipisahkan berdasarkan afinitas masing-masing komponen untuk fase gerak dalam kromatografi cair. Saat fase gerak dan sampel melewati kolom, komponen sampel mulai terpisah menjadi pita yang dapat dideteksi dengan spektroskopi UV-VIS. Oleh karena itu, FPLC dan HPLC adalah dua jenis teknik kromatografi cair.
Apa itu FPLC?
FPLC adalah jenis kromatografi cair yang memurnikan biomolekul besar seperti protein, nukleotida, dan peptida. Kromatografi cair protein cepat (FPLC) pertama kali dikembangkan dan dipasarkan di Swedia oleh perusahaan Pharmacia pada tahun 1982. Sering digunakan untuk menganalisis atau memurnikan campuran protein. Ini terjadi berdasarkan prinsip afinitas komponen sampel untuk fluida bergerak (fase gerak) dan bahan padat berpori (fase diam). Dalam FPLC, fase gerak adalah buffer, dan fase diam adalah resin yang terdiri dari manik-manik. Biasanya terdiri dari agarosa bertautan silang yang dikemas ke dalam gelas silinder atau kolom plastik.
Gambar 01: Alat FLPC (Kromatografi Cair Protein Cepat)
Di sebagian besar strategi FLPC, resin penukar ion digunakan. Oleh karena itu, protein yang diinginkan akan berikatan dengan resin melalui interaksi muatan. Teknik FLPC juga menggunakan dua buffer yaitu buffer 1 (buffer berjalan) dan buffer 2 (buffer elusi). Awalnya, saat menjalankan buffer dan campuran sampel berjalan melalui kolom, protein yang diinginkan dalam campuran akan mengikat resin dengan interaksi muatan. Tetapi protein yang diinginkan menjadi terdisosiasi dan kembali ke larutan dalam buffer elusi ketika buffer elusi mengalir melalui kolom pada akhir proses. Kemudian, larutan (eluan yang mengandung protein yang diinginkan) melewati dua detektor, yang mengukur konsentrasi garam dan konsentrasi protein. Karena setiap protein dielusi, ia muncul sebagai "puncak" selama deteksi dan dapat dikumpulkan untuk digunakan lebih lanjut.
Apa itu HPLC?
HPLC adalah jenis kromatografi cair yang memisahkan senyawa berbobot molekul kecil. Pada tahun 1969, HPLC pertama diproduksi secara komersial oleh Waters Corporation, AS. Dalam kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT), campuran sampel (analit) dalam pelarut (fase gerak) dipompa melalui kolom dengan bahan pengemas kromatografi (fase diam) pada tekanan tinggi. Campuran sampel dibawa oleh aliran gas pembawa helium atau nitrogen yang bergerak.
Gambar 02: HPLC (Kromatografi Cair Kinerja Tinggi)
Komponen dalam campuran sampel yang paling sedikit berinteraksi dengan fase diam atau paling banyak berinteraksi dengan fase gerak akan keluar kolom lebih cepat. Sebaliknya, komponen dalam campuran sampel yang paling banyak berinteraksi dengan fase diam atau paling sedikit berinteraksi dengan fase gerak akan keluar kolom lebih lambat. Berdasarkan prinsip interaksi di atas, komponen campuran sampel dapat dipisahkan. Selain itu, detektor instrumen mengidentifikasi setiap komponen campuran sampel yang keluar dari kolom. HPLC digunakan untuk memeriksa sampel lingkungan dan biologis untuk ada atau tidak adanya senyawa yang diketahui, seperti obat-obatan, racun atau pestisida. Ini digunakan di berbagai industri seperti farmasi, lingkungan, forensik, dan bahan kimia.
Apa Persamaan Antara FPLC dan HPLC?
- FPLC dan HPLC adalah jenis kromatografi cair.
- Keduanya digunakan untuk memisahkan dan mengidentifikasi sampel biologis.
- Mereka memiliki fase gerak cair dan fase diam padat.
- Kedua teknik menggunakan kolom untuk melewati sampel.
- Teknik ini menggunakan pompa, detektor, katup, dan perangkat lunak untuk pemisahan dan pendeteksian sampel.
Apa Perbedaan Antara FPLC dan HPLC?
FPLC adalah jenis kromatografi cair yang digunakan untuk memurnikan biomolekul besar seperti protein, nukleotida, dan peptida. HPLC adalah jenis kromatografi cair yang digunakan untuk memisahkan senyawa berbobot molekul kecil. Jadi, inilah perbedaan utama antara FPLC dan HPLC. Selain itu, FPLC menggunakan monitor pH dan konduktivitas serta pengumpul fraksi. Sebaliknya, HPLC tidak menggunakan monitor pH dan konduktivitas dan pengumpul fraksi.
Infografik di bawah ini mencantumkan lebih banyak perbedaan antara FPLC dan HPLC dalam bentuk tabel.
Ringkasan – FPLC vs HPLC
Kromatografi adalah teknik analisis laboratorium yang digunakan untuk pemisahan komponen dari campuran. Ini dibagi menjadi beberapa jenis seperti kromatografi kolom, kromatografi gas, kromatografi cair, kromatografi penukar ion, dll. FPLC dan HPLC adalah dua jenis teknik kromatografi cair. FPLC adalah jenis kromatografi cair yang digunakan untuk memurnikan biomolekul besar seperti protein, nukleotida, dan peptida. Di sisi lain, HPLC adalah jenis kromatografi cair yang digunakan untuk memisahkan senyawa dengan berat molekul kecil. Demikian rangkuman dari perbedaan FPLC dan HPLC.
