Perbedaan Kunci – RNASE A vs RNASE H
Ribonuklease adalah nuklease yang secara khusus mendegradasi RNA menjadi unit yang lebih kecil. Mereka dapat dibagi menjadi dua kategori; endoribonuklease dan eksoribonuklease. Endoribonuklease adalah endonuklease yang dapat mendegradasi RNA beruntai tunggal atau ganda. Ini memotong ikatan fosfodiester dalam rantai polinukleotida RNA. Contohnya adalah RNase A, RNase III, RNase T1, RNase P dan RNase H. Exoribonuclease adalah eksonuklease yang mendegradasi RNA dengan menghilangkan nukleotida terminal dari ujung 5 atau 3 dari molekul RNA. Contohnya adalah RNase R, RNase II, RNase D dan RNase PH. Perbedaan utama antara RNASE A dan RNASE H adalah bahwa RNase A adalah ribonuklease pankreas yang secara khusus mendegradasi RNA untai tunggal menjadi komponen yang lebih kecil sementara RNase H adalah enzim non-spesifik yang memotong RNA dalam hibrid RNA-DNA menjadi unit yang lebih kecil melalui mekanisme hidrolitik.
Apa itu RNASE A?
RNase A adalah ribonuklease pankreas yang secara khusus memotong residu sitosin dan urasil yang tidak berpasangan pada ujung 3’ RNA untai tunggal. RNase H bekerja pada konsentrasi garam yang lebih tinggi (0,3M atau konsentrasi NaCl yang lebih tinggi). Reaksi hidrolitik adalah dua langkah. Ini membentuk produk terfosforilasi 3 'melalui 2', 3' intermediet monofosfat siklik. Meskipun spesifik untuk RNA untai tunggal pada konsentrasi garam yang lebih tinggi, ia juga dapat mendegradasi RNA untai ganda dan RNA dalam hibrid RNA-DNA pada konsentrasi NaCl yang lebih rendah (lebih rendah dari 0,3M NaCl).
Bruce Merrifield pertama kali mensintesis enzim ini. RNase A adalah enzim yang sangat populer dalam penelitian molekuler. RNase A pankreas sapi adalah contoh RNase A. Dan ini adalah salah satu enzim paling keras yang digunakan di laboratorium. Enzim ini tidak memerlukan kofaktor untuk aktivitasnya. Ini adalah enzim yang sangat termostabil. RNase A adalah enzim pertama dan protein ketiga yang urutan asam aminonya benar terdeteksi. Enzim ini sangat kecil dengan 124 asam amino dan massa molekul 12600da. Dan memiliki empat residu Histidin (His 12 dan His 119 yang terlibat dalam reaksi katalitik).
Gambar 01: RNase A
RNase A dapat diisolasi dengan merebus sampel mentah. Saat mendidih, semua enzim lain mendegradasi sisa RNase A. RNase A adalah enzim yang sangat stabil. Enzim ini menghambat dengan protein ribonuclease inhibitor, logam berat dan kompleks uridin vanadat.
Apa itu RNase H?
The RNase H adalah enzim ribonuklease nonspesifik yang dapat mendegradasi RNA dalam hibrid RNA-DNA melalui reaksi hidrolitik. RNase H memotong 3'- ikatan O-P RNA dalam hibrid RNA-DNA. Pada akhirnya menghasilkan produk terminasi 3'OH dan 5' fosfat. Dalam replikasi DNA, ia memainkan peran penting dengan menghilangkan primer RNA setelah untai DNA baru terbentuk. Dalam kondisi laboratorium, secara khusus mendegradasi RNA pada RNA-DNA hybrid tetapi tidak pada DNA dan RNA yang tidak dihibridisasi. Dan enzim ini biasanya digunakan untuk menghancurkan template RNA setelah untai DNA komplementer pertama terbentuk selama sintesis cDNA.
Gambar 02: RNase H
RNase H juga digunakan dalam uji proteksi nuklease. Itu juga dapat dimasukkan untuk menghilangkan ekor poli A dari mRNA. RNase H memiliki kemampuan untuk menghancurkan RNA non-coding di dalam dan di luar sel. Ion logam diperlukan sebagai kofaktor untuk aktivitas protein ini. Sebuah chelator (EDTA) dapat digunakan untuk menghambat enzim RNase H.
Apa Persamaan RNASE A dan RNASE H?
- Keduanya adalah protein di alam.
- Keduanya adalah endoribonuklease
- Keduanya dapat mendegradasi RNA.
- Keduanya melakukan reaksi hidrolitik.
- Laboratorium molekuler menggunakan keduanya.
Apa Perbedaan RNASE A dan RNASE H?
RNASE A vs RNASE H |
|
| RNase A adalah ribonuklease pankreas yang secara spesifik memotong ujung 3’ dari residu sitosin dan urasil yang tidak berpasangan dari RNA untai tunggal pada konsentrasi garam yang lebih tinggi. | RNase H adalah enzim ribonuklease nonspesifik yang dapat mendegradasi RNA pada hibrid RNA-DNA melalui reaksi hidrolitik. |
| Sifat Pembelahan RNA | |
| RNase A secara khusus memotong RNA untai tunggal pada konsentrasi garam yang lebih tinggi. | RNase H memotong RNA dalam hibrid RNA- DNA. |
| Kebutuhan Co-faktor untuk Aktivitas | |
| RNase A tidak membutuhkan kofaktor untuk aktivitasnya. | RNase H membutuhkan ion logam sebagai kofaktor untuk aktivitasnya. |
| Penghambat Aktivitas Protein | |
| Protein inhibitor ribonuklease, logam berat dan kompleks uridin vanadat menghambat aktivitas RNAse A. | A chelator (EDTA) menghambat aktivitas RNase H. |
| Penghapusan Primer RNA dalam Replikasi DNA | |
| RNase A tidak digunakan untuk menghilangkan primer RNA dalam replikasi DNA. | RNase H digunakan untuk menghilangkan primer RNA dalam replikasi DNA |
| Penghapusan Template DNA dalam Sintesis DNA Pelengkap (C-DNA) | |
| RNase A tidak digunakan untuk menghilangkan template RNA selama sintesis DNA komplementer (C-DNA). | RNase H digunakan untuk menghilangkan template RNA selama sintesis komplementer DNA (C-DNA). |
| Penghilangan Poly-A-Tail pada mRNA Hibridisasi ke Oligo (dt) | |
| RNase A tidak digunakan untuk menghilangkan “poly-A tail” pada mRNA yang dihibridisasi menjadi oligo (dt). | RNase H digunakan untuk menghilangkan “poly-A tail” pada mRNA yang dihibridisasi menjadi oligo (dt) |
Ringkasan – RNASE A vs RNASE H
Ribonuklease adalah enzim nuklease yang memiliki kemampuan untuk memecah RNA menjadi unit yang lebih kecil. Mereka adalah dua jenis; endoribonuklease dan eksoribonuklease. Endoribonuklease merupakan endonuklease yang memiliki kemampuan untuk mendegradasi RNA untai tunggal atau untai ganda. Dan itu memutuskan ikatan fosfodiester dalam rantai polinukleotida RNA. RNase A dan RNase H adalah dua endoribonuklease. RNase A adalah ribonuklease pankreas yang secara khusus memotong residu sitosin dan urasil yang tidak berpasangan pada ujung 3' RNA untai tunggal pada konsentrasi garam yang lebih tinggi. RNase H merupakan enzim ribonuklease nonspesifik yang dapat mendegradasi RNA pada hibrid RNA-DNA melalui reaksi hidrolitik. Inilah perbedaan antara RNase A dan RNase H.
Download PDF RNASE A vs RNASE H
Anda dapat mengunduh versi PDF dari artikel ini dan menggunakannya untuk tujuan offline sesuai catatan kutipan. Silakan unduh versi PDF di sini Perbedaan Antara RNASE A dan RNASE H
