Perbedaan Kunci – Kertas vs Kromatografi Lapis Tipis vs Kromatografi Kolom
Kromatografi kertas, kromatografi lapis tipis, dan kromatografi kolom adalah tiga jenis teknik kromatografi. Perbedaan utama antara kromatografi kertas, kromatografi lapis tipis dan kromatografi kolom didasarkan pada jenis fase diam yang digunakan dalam teknik kromatografi. Kromatografi kertas menggunakan kertas selulosa sebagai fase diamnya, Kromatografi Lapis Tipis menggunakan alumina atau silika gel sebagai fase diamnya, sedangkan kromatografi kolom menggunakan kolom yang dikemas dengan bahan matriks yang sesuai sebagai fase diamnya.
Dalam proses pemisahan dan identifikasi biomolekul seperti protein dan karbohidrat, kromatografi merupakan teknik biofisik penting yang digunakan. Kromatografi memisahkan senyawa berdasarkan kelarutan, ukuran dan muatannya. Berdasarkan mekanisme pemisahan, kromatografi menggunakan mekanisme seperti pertukaran ion, penyerapan, partisi dan eksklusi ukuran dan ada tiga teknik kromatografi; yaitu, kromatografi kertas, kromatografi lapis tipis, dan kromatografi kolom. Kromatografi kertas didasarkan pada adsorpsi padat-cair dan kelarutan senyawa, dan menggunakan kertas selulosa sebagai fase diam. Kromatografi lapis tipis didasarkan pada adsorpsi padat-cair molekul. Ini memiliki fase diam yang biasanya terbuat dari alumina atau silika gel dan fase gerak yang merupakan pelarut. Kromatografi kolom menggunakan kolom yang dikemas dengan matriks yang digunakan untuk memisahkan molekul terutama berdasarkan ukuran, afinitas, atau muatannya.
Apa itu Kromatografi Kertas?
Kromatografi kertas adalah jenis kromatografi paling sederhana yang digunakan, dan tidak digunakan untuk penelitian ekstensif. Hal ini terutama digunakan di laboratorium siswa untuk mengidentifikasi biomolekul seperti asam amino dan karbohidrat yang ada dalam campuran. Kromatografi kertas menggunakan fase diam yang dibuat menggunakan kertas selulosa atau kertas saring Whatman dan fase gerak yang biasanya dibuat menggunakan pelarut organik seperti n-butanol, dll. Fase diam dijenuhkan dengan air, membuat fase diam menjadi cair. Jadi, ketika senyawa terlihat dan dibiarkan berjalan dengan adanya fase gerak, tergantung pada kelarutan senyawa, mereka dipisahkan. Dengan demikian, pada pengembangan kromatogram, pewarnaan dapat dilakukan untuk menentukan panjang lintasan masing-masing senyawa. Faktor retensi dengan demikian dapat dihitung.
Gambar 01: Kromatografi Kertas
Kromatografi kertas dapat diklasifikasikan lebih lanjut sebagai kromatografi kertas naik dan kromatografi kertas turun tergantung pada arah pelarut yang mengalir.
Apa itu Kromatografi Lapis Tipis?
Kromatografi lapis tipis atau KLT adalah teknik yang umum digunakan untuk mengidentifikasi berbagai asam amino yang ada dalam campuran atau untuk mengidentifikasi protein. Teknik pemisahan didasarkan pada adsorpsi padat-cair. Selama kromatografi lapis tipis, pelat yang terbuat dari alumina atau silika gel digunakan sebagai fase diam. Campuran pelarut bervariasi sesuai kebutuhan dan dapat menggunakan kombinasi yang berbeda dari senyawa organik seperti n-butanol, asam asetat, dan air untuk menyiapkan pelarut. Senyawa yang akan dipisahkan terlihat di piring dan direndam dalam campuran pelarut. Begitu pelarut bergerak naik berdasarkan aksi kapiler yang diberikan oleh pelat, senyawa yang terlihat di pelat juga bergerak tergantung pada kelarutannya dalam pelarut.
Gambar 02: Kromatografi Lapis Tipis
Pendeteksian noda setelah kromatogram dilakukan dengan prosedur pewarnaan yang berbeda. Beberapa menggunakan pewarnaan ninhidrin yang merupakan metode pewarnaan yang cukup beracun. Kromatogram lapis tipis modern menggunakan teknik fluoresensi untuk melihat kromatogram setelah dijalankan. Tergantung pada jarak yang ditempuhnya, waktu retensi masing-masing senyawa dapat dihitung. Hal ini dapat digunakan untuk mengidentifikasi jenis senyawa yang dipisahkan berdasarkan campuran yang digunakan. KLT terutama digunakan untuk mengidentifikasi asam amino dalam campuran protein dan juga untuk memisahkan berbagai jenis monosakarida yang ada dalam campuran.
Apa itu Kromatografi Kolom?
Kromatografi kolom adalah istilah luas yang digunakan untuk menggambarkan berbagai jenis teknik kromatografi yang menggunakan metode pemisahan berbasis kolom. Dalam kromatografi kolom, kolom fisik digunakan dengan bahan pengemas untuk memisahkan senyawa. Pemisahan mungkin didasarkan pada sifat fisik yang berbeda yang ditunjukkan oleh senyawa. Sifat-sifat ini dapat berupa muatan, ukuran, konformasi 3D dan kapasitas pengikatan, dll. Dengan demikian, kolom yang dikemas dengan bahan matriks bertindak sebagai fase diam dan buffer pencuci yang diterapkan pada kolom bertindak sebagai fase gerak.
Jika molekul dipisahkan berdasarkan ukurannya, bahan pengemas dikemas sedemikian rupa sehingga meninggalkan pori-pori untuk dilalui senyawa. Dengan demikian, molekul yang lebih besar yang tidak dapat mengalir melalui pori-pori akan dielusi terlebih dahulu, sedangkan molekul yang lebih kecil membutuhkan waktu yang lebih lama untuk terelusi.
Gambar 03: Kromatografi Kolom
Jika molekul dipisahkan berdasarkan muatannya, fase diam akan mengandung penukar anion atau kation dimana senyawa akan tertarik berdasarkan muatannya. Jadi selama langkah pencucian, senyawa yang tidak terikat akan dielusi. Setelah menambahkan buffer elusi, senyawa bermuatan terikat akan dielusi. Deteksi eluen ini sebagian besar didasarkan pada teknik spektrofotometri.
Apa Persamaan Antara Kromatografi Lapis Kertas dan Kromatografi Kolom?
- Semua Kertas Lapis Tipis dan Kromatografi Kolom tiga teknik yang digunakan untuk pemisahan biomolekul seperti asam amino, protein dan karbohidrat.
- Teknik Kromatografi Lapis Tipis dan Kolom memiliki fase gerak dan fase diam.
- Teknik Kromatografi Lapis Tipis dan Kolom Kertas menggunakan mekanisme biofisik untuk pemisahan.
Apa Perbedaan Kromatografi Lapis Tipis Kertas dan Kromatografi Kolom?
Kromatografi Kertas vs Kromatografi Lapis Tipis vs Kolom |
|
| Kromatografi Kertas | Kromatografi kertas adalah teknik kromatografi yang digunakan untuk memisahkan senyawa berdasarkan adsorpsi cair-cair dan kelarutan senyawa. Ini menggunakan kertas selulosa sebagai fase diamnya. |
| Kromatografi Lapis Tipis | Kromatografi lapis tipis adalah teknik kromatografi lain yang didasarkan pada adsorpsi padat-cair molekul. Ini memiliki fase diam yang terbuat dari alumina atau silika gel dan pelarut sebagai fase gerak, yang merupakan pelarut. |
| Kromatografi Kolom | Kromatografi kolom menggunakan kolom yang dikemas dengan matriks yang digunakan untuk memisahkan molekul terutama berdasarkan ukuran, afinitas, atau muatannya. |
| Fase Stasioner | |
| Kromatografi Kertas | Kertas yang terbuat dari nitroselulosa dari Whatman digunakan sebagai fase diam dalam kromatografi kertas. |
| Kromatografi Lapis Tipis | Alumina atau Silica gel digunakan sebagai fase diam kromatografi lapis tipis. |
| Kromatografi Kolom | Sebuah kolom yang dikemas dengan bahan pengemas yang sesuai digunakan sebagai fase diam dalam kromatografi kolom. |
| Fase Seluler | |
| Kromatografi Kertas | Running solvent adalah fase gerak dari kromatografi kertas. |
| Kromatografi Lapis Tipis | Running solvent adalah fase gerak kromatografi lapis tipis. |
| Kromatografi Kolom | Cuci buffer adalah fase gerak dari kromatografi kolom. |
| Mekanisme yang Digunakan untuk Pemisahan | |
| Kromatografi Kertas | Kromatografi kertas didasarkan pada penyerapan padat-cair. |
| Kromatografi Lapis Tipis | Kromatografi lapis tipis didasarkan pada penyerapan padat-cair. |
| Kromatografi Kolom | Kromatografi kolom didasarkan pada pengecualian ukuran, muatan dan bentuk. |
| Elution Buffer | |
| Kromatografi Kertas | Tidak diperlukan oleh kromatografi kertas. |
| Kromatografi Lapis Tipis | Tidak diperlukan untuk kromatografi lapis tipis. |
| Kromatografi Kolom | Diperlukan dalam kromatografi kolom. |
| Deteksi | |
| Kromatografi Kertas | Pewarnaan dan dengan menentukan faktor Retensi. |
| Kromatografi Lapis Tipis | Pewarnaan dan dengan menentukan faktor Retensi. |
| Kromatografi Kolom | Penentuan spektrofotometri. |
Ringkasan – Kromatografi Lapis Kertas vs Kromatografi Kolom
Kromatografi kertas, KLT dan kromatografi kolom adalah teknik pemisahan yang digunakan untuk memisahkan biomolekul seperti protein, asam amino dan karbohidrat (terutama monosakarida). Kromatografi kertas menggunakan kertas selulosa sebagai fase diam, dan mekanisme pemisahannya didasarkan pada adsorpsi padat-cair. TLC juga menggunakan mekanisme adsorpsi padat-cair. Molekul-molekul dipisahkan pada fase diam, tergantung pada kelarutannya dalam fase gerak. Kromatografi kolom menggunakan sifat fisik seperti ukuran, bentuk, muatan dan berat molekul senyawa untuk memisahkan. Kolom yang dikemas dengan bahan matriks bertindak sebagai fase diam, sedangkan buffer pencuci bertindak sebagai fase pelarut. Inilah perbedaan antara kromatografi lapis tipis kertas dan kromatografi kolom.
