Perbedaan Kunci – Gel Penumpukan vs Gel Pemisah
Istilah gel susun dan gel pemisah digunakan untuk menjelaskan teknik SDS-PAGE. SDS-PAGE atau elektroforesis gel sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide adalah teknik laboratorium yang digunakan untuk memisahkan molekul protein berdasarkan berat molekulnya. Teori di balik teknik ini adalah bahwa protein dengan berat molekul berbeda menunjukkan tingkat migrasi yang berbeda; molekul dengan berat molekul rendah bermigrasi lebih cepat sedangkan molekul dengan berat molekul tinggi bermigrasi perlahan. Media untuk migrasi adalah gel. Ada dua jenis gel yang disebut sebagai gel susun dan gel pemisah. Perbedaan utama antara gel susun dan gel pemisah adalah pH gel penumpuk adalah 6,8 sedangkan pH gel pemisah adalah 8,8.
Apa itu Stacking Gel?
Stacking gel adalah gel poliakrilamida berkonsentrasi rendah yang ditempatkan di atas gel pelarut yang lebih pekat (gel pemisah) dalam teknik SDS-PAGE. Gel susun digunakan untuk meningkatkan resolusi elektroforesis. Resolusi meningkat karena perbedaan antara konsentrasi gel susun dan gel pengurai yang berpengaruh pada protein dalam sampel. Karena konsentrasi poliakrilamida dalam gel susun rendah, ukuran pori lebih tinggi. Ini juga membantu dalam meningkatkan pemisahan.
Gel susun adalah gel poliakrilamida longgar dengan pori-pori besar sekitar 7% poliakrilamida. Pori-pori ini tidak bertindak sebagai penghalang yang cukup besar untuk molekul protein besar. Oleh karena itu gel ini sedikit mempengaruhi mobilitas protein tersebut. Ini membuat pemisahan menurut mobilitas dan ukuran protein dengan memusatkannya di antara dua gel.
Gambar 01: SDS-PAGE Acrylamide Gel
PH gel susun adalah 6,8. PH-nya bersifat asam dibandingkan dengan pelarut gel sebanyak 2 unit pH. PH ini menyiratkan kekuatan ion yang lebih rendah sehingga hambatan listrik yang lebih tinggi. Ini memicu mobilitas protein daripada partikel bermuatan lain yang ada dalam gel.
Apa itu Separating Gel?
Gel pemisah atau gel pengurai dari teknik SDS-PAGE adalah gel poliakrilamida dengan konsentrasi tinggi yang ditempatkan di atas gel susun dengan konsentrasi rendah. Gel pemisah mengandung poliakrilamida dalam jumlah tinggi (10%). PH gel ini dipertahankan sebagai pH=8,8, yang merupakan tingkat pH yang lebih tinggi dari gel susun.
Gambar 02: Alat Elektroforesis Gel
Ketika molekul protein mencapai gel pemisah, migrasi molekul-molekul tersebut melambat karena gel pemisah adalah gel konsentrasi tinggi dengan ukuran pori kecil yang dapat bertindak sebagai penghalang yang cukup besar untuk pergerakan molekul protein. Perlambatan ini memungkinkan protein lain bermigrasi perlahan untuk mengejar, menghasilkan pita yang sempit dan terkonsentrasi di antara kedua gel.
Apa Hubungan Stacking Gel dan Separating Gel?
Jenis Stacking Gel dan Separating Gel digunakan pada peralatan yang sama
Apa Perbedaan Stacking Gel dan Separating Gel?
Stacking Gel vs Separating Gel |
|
| Stacking gel adalah gel poliakrilamida berkonsentrasi rendah yang ditempatkan di atas gel pelarut yang lebih pekat (gel pemisah) dalam teknik SDS-PAGE. | Gel pemisah atau gel pengurai dari teknik SDS-PAGE adalah gel poliakrilamida dengan konsentrasi tinggi yang ditempatkan di atas gel susun dengan konsentrasi rendah. |
| Penempatan | |
| Stacking gel ditempatkan pada pelarut (separating) gel. | Gel pemisah diletakkan di bagian bawah wadah yang digunakan untuk elektroforesis gel. |
| Konsentrasi | |
| Konsentrasi stacking gel tinggi. | Konsentrasi gel pemisah rendah. |
| Kandungan Poliakrilamida | |
| Stacking gel mengandung sekitar 7% poliakrilamida. | Separating gel mengandung sekitar 10% poliakrilamida. |
| pH | |
| PH gel susun adalah 6,8. | PH gel pemisah adalah 8,8. |
| Ukuran Pori | |
| Ukuran pori besar hadir dalam gel susun. | Ukuran pori-pori kecil hadir dalam memisahkan gel. |
| Resolusi | |
| Stacking gel memberikan resolusi yang lebih baik. | Separating gel memberikan resolusi yang buruk. |
Ringkasan – Gel Penumpukan vs Gel Pemisah
Gel susun dan gel pemisah adalah dua jenis gel poliakrilamida yang digunakan untuk mendapatkan pemisahan molekul protein yang lebih baik dalam sampel tertentu. Perbedaan antara stacking gel dan separator gel adalah bahwa pH stacking gel adalah 6,8 sedangkan pH dari gel pemisah adalah 8,8.
