Perbedaan utama antara filtrasi gel dan kromatografi afinitas adalah bahwa kromatografi filtrasi gel bergantung pada perbedaan berat molekul atau ukuran sampel analit, sedangkan kromatografi afinitas bergantung pada afinitas analit terhadap ligan yang tidak bergerak.
Istilah kromatografi dalam kimia analitik mengacu pada proses pemisahan komponen dalam campuran menggunakan teknik yang berbeda. Kromatografi adalah nama kolektif yang mewakili sejumlah metode yang berbeda untuk pemisahan.
Apa itu Kromatografi Filtrasi Gel?
Kromatografi filtrasi gel adalah teknik analisis di mana pemisahan komponen bergantung pada perbedaan berat atau ukuran molekul. Teknik ini juga dikenal sebagai kromatografi eksklusi ukuran atau kromatografi saringan molekuler. Teknik pemisahan dalam proses ini tergantung pada perbedaan kemampuan molekul dalam sampel untuk masuk ke dalam pori-pori media filtrasi gel.
Dalam teknik filtrasi gel, fase diam mengandung butiran terhidrasi, bahan seperti spons yang memiliki pori-pori dengan dimensi molekul yang mengandung kisaran ukuran yang sempit. Jika kita melewatkan larutan berair yang terdiri dari molekul dengan berbagai ukuran melalui kolom yang mengandung “saringan molekuler” ini, molekul yang lebih besar dari pori-pori media filtrasi bergerak cepat melalui kolom. Sebaliknya, molekul yang lebih kecil memasuki pori-pori gel dan cenderung bergerak perlahan melalui kolom. Molekul dielusi dari kolom dalam urutan penurunan ukuran molekul. Di sini, batas eksklusi gel adalah massa molekul molekul terkecil yang tidak dapat menembus pori-pori gel tertentu.
Ada berbagai jenis teknik filtrasi gel, seperti metode filtrasi gel tidak langsung, filtrasi gel kondisi tunak, dialisis manik-manik gel, dll. Kromatografi filtrasi gel tidak langsung berguna dalam penentuan hormon tiroid bebas. Kromatografi filtrasi gel keadaan tunak adalah teknik tidak langsung yang sebagian besar berguna untuk pengukuran steroid bebas seperti kortisol, testosteron, dll. Dialisis manik gel, di sisi lain, adalah modifikasi filtrasi gel keadaan tunak yang relatif lebih sederhana.
Apa itu Kromatografi Afinitas?
Kromatografi afinitas adalah teknik analisis dan metode pemisahan yang bergantung pada interaksi pengikatan spesifik antara ligan yang tidak bergerak dan pasangan pengikatnya. Beberapa contoh termasuk pengikatan antibodi-antigen, pengikatan enzim-substrat, dan pengikatan enzim-inhibitor. Oleh karena itu, teknik ini memiliki banyak aplikasi penting dalam pemurnian asam nukleat, pemurnian protein dari ekstrak sel, dan pemurnian dari darah.
Dalam teknik ini, sifat terpenting adalah imobilisasi ligan. Kita bisa menggunakan berbagai bahan seperti akrilat dan silika gel untuk ini. Hal ini penting untuk mencegah interferensi sterik dari molekul target ke ligan. Selain itu, inhibitor melekat pada fase padat. Kami menyebut penghambat ini sebagai pengatur jarak. Secara klasik, spacer terdiri dari rantai hidrokarbon.
Fase diam dari kromatografi afinitas mengandung inti, spacer, dan ligan. Terkadang, ia juga memiliki ion logam yang digabungkan ke ligan. Fase padat yang paling disukai untuk fase diam dalam teknik ini adalah gel agarosa karena mudah dikeluarkan untuk mengisi dan mengemas kolom dengan unggun resin dari berbagai ukuran, dan cukup besar untuk biomolekul mengalir bebas ke dalam dan melalui manik-manik. Ligan dapat secara kovalen menempel pada polimer manik dengan berbagai cara. Senyawa spacer yang paling umum adalah sianogen bromida, epoksida, epoksida dengan asam C6, dan diamin. Di sisi lain, ligan yang dapat kita gunakan berbeda sesuai dengan targetnya, misalnya antibodi-antigen, ion besi atau aluminium-fosfoprotein, avidin-biotin, glutathione-GST, chelator-His-tagged protein, dll.
Apa Perbedaan Filtrasi Gel dan Kromatografi Afinitas?
Kromatografi adalah teknik analisis yang penting. Kromatografi filtrasi gel dan kromatografi afinitas adalah dua variasi penting dari kromatografi. Perbedaan utama antara filtrasi gel dan kromatografi afinitas adalah bahwa kromatografi filtrasi gel bergantung pada perbedaan berat molekul atau ukuran sampel analit, sedangkan kromatografi afinitas bergantung pada afinitas analit terhadap ligan yang tidak bergerak.
Ringkasan – Filtrasi Gel vs Kromatografi Afinitas
Ada berbagai jenis teknik kromatografi menurut aplikasinya dan sifat sampel analit. Filtrasi gel dan kromatografi afinitas adalah dua jenis teknik tersebut. Perbedaan utama antara filtrasi gel dan kromatografi afinitas adalah bahwa kromatografi filtrasi gel bergantung pada perbedaan berat molekul atau ukuran sampel analit, sedangkan kromatografi afinitas bergantung pada afinitas analit terhadap ligan amobil.
