Perbedaan utama antara kromatografi afinitas dan pertukaran ion adalah bahwa kita dapat menggunakan kromatografi afinitas untuk memisahkan komponen bermuatan atau tidak bermuatan dalam campuran sedangkan kita dapat menggunakan kromatografi penukar ion untuk memisahkan komponen bermuatan dalam campuran.
Kromatografi adalah teknik yang dapat kita gunakan untuk memisahkan komponen yang diinginkan dalam suatu campuran. Ada berbagai jenis seperti kromatografi cair, kromatografi gas, dll. Kromatografi afinitas dan kromatografi pertukaran ion adalah dua subkategori kromatografi cair. Juga, dalam teknik ini, ada dua fase. Yaitu, fase diam dan fase gerak. Tujuan dari teknik ini adalah untuk memisahkan komponen, tergantung pada pengikatan komponen, dalam fase gerak ke permukaan fase diam.
Apa itu Kromatografi Afinitas?
Kromatografi afinitas adalah teknik biokimia yang kami gunakan untuk memisahkan komponen dalam campuran tergantung pada interaksi antara komponen ini.
Interaksi yang kami gunakan dalam hal ini antara lain sebagai berikut:
- Interaksi antigen-antibodi
- Interaksi enzim-substrat
- Interaksi reseptor-ligan
- Interaksi protein-asam nukleat
Dalam teknik ini, kami menggunakan sifat molekular molekul untuk teknik pemisahan ini. Di sini, kami mengizinkan senyawa yang diinginkan untuk berinteraksi dengan fase diam melalui ikatan hidrogen, interaksi ionik, jembatan disulfida, interaksi hidrofobik, dll. Molekul yang tidak berinteraksi dengan fase diam akan terelusi terlebih dahulu. Dengan demikian, kita dapat memisahkannya dari campuran. Senyawa yang diinginkan akan tetap melekat pada fase diam. Oleh karena itu, kita dapat melepaskannya menggunakan pelarut elusi dan membuatnya terelusi untuk memisahkannya juga.
Gambar 01: Kolom Kromatografi
Kromatografi afinitas berguna dalam pemurnian dan pemekatan zat dari campuran menggunakan larutan penyangga. Juga, sangat membantu dalam mengurangi zat yang tidak diinginkan dalam campuran. Saat mempertimbangkan peralatan yang kami gunakan untuk proses ini, kami harus menggunakan kolom yang diisi dengan fase diam kami. Kemudian, kita harus memuat fase gerak yang berisi biomolekul yang akan kita pisahkan. Selanjutnya, biarkan mereka mengikat dengan fase diam. Setelah itu, dengan menggunakan wash buffer, kita dapat memisahkan biomolekul non-target, tetapi molekul target harus memiliki afinitas tinggi untuk fase diam agar proses pemisahan berhasil.
Apa itu Kromatografi Pertukaran Ion?
Kromatografi ion adalah bentuk kromatografi cair di mana kita dapat menganalisis zat ionik. Seringkali, kami menggunakannya untuk menganalisis anion dan kation anorganik (yaitu anion klorida dan nitrat dan kalium, kation natrium). Meskipun kurang umum, kita dapat menganalisis ion organik juga. Selain itu, kita dapat menggunakan teknik ini untuk pemurnian protein karena protein adalah molekul bermuatan pada nilai pH tertentu. Di sini, kami menggunakan fase diam padat di mana partikel bermuatan dapat menempel. Sebagai contoh, kita dapat menggunakan kopolimer resin polistirena-divinilbenzena sebagai penyangga padat.
Gambar 02: Fase Kromatografi Pertukaran Ion
Untuk menjelaskan hal ini lebih lanjut, fase diam memiliki ion tetap seperti anion sulfat atau kation amina kuaterner. Masing-masing harus berasosiasi dengan counterion (ion dengan muatan berlawanan), jika kita ingin menjaga netralitas sistem ini. Di sini, jika counterion adalah kation, maka kami menamakan sistem ini sebagai resin penukar kation. Tetapi, jika counterion adalah anion, sistemnya adalah resin penukar anion.
Ada lima fase utama dalam proses pertukaran ion;
- Tahap awal
- Adsorpsi target
- Mulai elusi
- Akhir elusi
- Regenerasi
Apa Perbedaan Kromatografi Afinitas dan Pertukaran Ion?
Kromatografi afinitas adalah teknik biokimia yang kami gunakan untuk memisahkan komponen dalam campuran tergantung pada interaksi antara komponen ini sedangkan kromatografi ion adalah bentuk kromatografi cair di mana kami dapat menganalisis zat ionik. Oleh karena itu, perbedaan utama antara kromatografi pertukaran ion dan afinitas adalah bahwa kita dapat menggunakan kromatografi penukar ion hanya untuk pemisahan zat ionik sedangkan kromatografi afinitas mampu memisahkan partikel bermuatan dan tidak bermuatan. Ketika mempertimbangkan prinsip kerja, perbedaan antara kromatografi afinitas dan pertukaran ion adalah bahwa kromatografi afinitas berlangsung karena fakta bahwa molekul target memiliki afinitas tinggi untuk fase diam. Namun, untuk kromatografi pertukaran ion, molekul target memiliki muatan yang berlawanan dengan muatan permukaan fase diam.
Infografik di bawah ini menyajikan perbedaan antara kromatografi afinitas dan pertukaran ion sebagai perbandingan berdampingan.
Ringkasan – Kromatografi Afinitas vs Pertukaran Ion
Ringkasnya, kromatografi afinitas dan pertukaran ion adalah dua bentuk teknik kromatografi cair. Perbedaan utama antara kromatografi afinitas dan pertukaran ion adalah bahwa kita dapat menggunakan kromatografi afinitas untuk memisahkan komponen bermuatan atau tidak bermuatan dalam campuran sedangkan kita dapat menggunakan kromatografi penukar ion untuk memisahkan komponen bermuatan dalam campuran.
