Perbedaan utama antara pemfokusan kromatografi dan pemfokusan isoelektrik adalah pemfokusan kromatografi adalah jenis metode kromatografi kolom yang menggunakan resin penukar ion sedangkan pemfokusan isoelektrik adalah jenis teknik elektroforesis yang menggunakan gel gradien pH amobil.
Pemfokusan kromo dan pemfokusan isoelektrik adalah dua teknik yang memisahkan protein berdasarkan titik isoelektriknya. Baik pemfokusan kromato dan pemfokusan isoelektrik memiliki daya pisah yang besar. Pemfokusan kromo adalah metode kromatografi kolom resolusi tinggi sedangkan pemfokusan isoelektrik adalah metode pemisahan elektroforesis. Selain itu, pemfokusan kromato tidak menggunakan medan listrik sedangkan pemfokusan isoelektrik membutuhkan medan listrik.
Apa itu Chromatofocusing?
Pemfokusan kromo adalah jenis kromatografi elusi tinggi yang memisahkan protein berdasarkan perbedaan titik isoelektriknya. Ini menggunakan kolom resin penukar ion dan gradien pH yang dikembangkan secara internal. Tidak seperti pemfokusan isoelektrik, pemfokusan kromato tidak melibatkan medan listrik. Chromatofocusing adalah teknik pemurnian yang kuat yang dapat menyelesaikan molekul yang sangat mirip bahkan hanya berbeda 0,02 unit pH. Oleh karena itu, pemfokusan kromo paling cocok sebagai langkah pemolesan akhir saat diperlukan resolusi tinggi dalam memisahkan komponen yang sangat mirip.
Dalam chromatofocusing, sampel diterapkan ke kolom dengan mencampurnya dengan buffer awal. Protein yang berada pada pH di atas titik isoelektriknya bermuatan negatif dan mereka tetap berada di dekat bagian atas kolom sementara protein lain yang berada pada pH di bawah titik isoelektriknya, bermigrasi ke bawah kolom. Protein dengan titik isoelektrik tertinggi dielusi terlebih dahulu sedangkan protein dengan titik isoelektrik terendah dielusi terakhir dari kolom. Teknik ini dipengaruhi oleh beberapa faktor seperti pengendapan protein dan linieritas gradien pH.
Apa itu Pemfokusan Isoelektrik?
Pemfokusan isoelektrik adalah teknik yang memisahkan molekul yang berbeda berdasarkan titik isoelektriknya. Hal ini juga dikenal sebagai elektrofokus. Teknik ini sering digunakan untuk pemisahan protein dalam gel. Dalam pemfokusan isoelektrik, sampel ditambahkan ke dalam gel gradien pH amobil (IPG). Gel IPG adalah matriks gel akrilamida yang dikopolimerisasi dengan gradien pH. Protein bermigrasi menuju katoda sampai mereka menemukan daerah pH titik isoelektriknya. Ketika protein mencapai pH yang tidak memiliki muatan bersih, migrasi berhenti dan memberikan pita stasioner. Demikian juga, setiap protein memberikan pita pada suatu titik dalam gradien pH yang sesuai dengan titik isoelektriknya.
Gambar 01: Pemfokusan Isoelektrik
Pemfokusan isoelektrik adalah langkah pertama dari elektroforesis gel dua dimensi. Dalam teknik tersebut, protein pertama-tama dipisahkan menurut titik isoelektriknya dengan pemfokusan isoelektrik dan kemudian dipisahkan berdasarkan berat molekulnya melalui SDS-PAGE.
Apa Persamaan Antara Pemfokusan Kromatosa dan Pemfokusan Isoelektrik?
- Pemfokusan kromo dan pemfokusan isoelektrik adalah dua metode penyelesaian tinggi.
- Keduanya didasarkan pada titik isoelektrik protein.
- Teknik ini menggunakan gradien pH.
- Kedua prosedur ini informatif untuk karakterisasi varian hemoglobin manusia.
- Mereka dapat menyelesaikan molekul di mana nilai pI berbeda sedikitnya 0,02 unit pH.
Apa Perbedaan Antara Pemfokusan Kromatosa dan Pemfokusan Isoelektrik?
Chromatofocusing adalah teknik kromatografi kolom resolusi tinggi yang memisahkan protein menurut titik isoelektriknya. Sebaliknya, pemfokusan isoelektrik adalah teknik elektroforesis yang memisahkan protein menurut titik isoelektriknya dengan penerapan medan listrik di sepanjang gradien pH yang terbentuk dalam kapiler. Jadi, inilah perbedaan utama antara pemfokusan kromato dan pemfokusan isoelektrik.
Perbedaan lain antara pemfokusan kromato dan pemfokusan isoelektrik adalah pemfokusan kromato tidak melibatkan medan listrik sedangkan pemfokusan isoelektrik membutuhkan medan listrik.
Ringkasan – Chromatofocusing vs Isoelectric Focusing
Pemfokusan kromo dan pemfokusan isoelektrik adalah dua teknik serupa yang memiliki kemampuan pemecahan molekul yang tinggi, terutama molekul yang sangat mirip. Pemfokusan kromo adalah teknik kromatografi kolom resolusi tinggi sedangkan pemfokusan isoelektrik adalah metode elektroforesis. Pemfokusan kromo tidak melibatkan medan listrik, tidak seperti pemfokusan isoelektrik. Jadi, ini merangkum perbedaan antara pemfokusan kromato dan pemfokusan isoelektrik.
