Perbedaan utama antara ELISA kompetitif dan nonkompetitif adalah bahwa ELISA kompetitif menggunakan antigen penghambatan sedangkan ELISA nonkompetitif tidak menggunakan antigen penghambat untuk pengujian.
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) adalah uji imunologis yang mendeteksi berbagai target seperti antibodi, antigen, protein, dan glikoprotein. Ini adalah metode yang cepat dan sederhana untuk dilakukan. Oleh karena itu, lebih sering digunakan untuk tujuan penelitian dan diagnostik. ELISA melibatkan penggunaan enzim dan pengikatan spesifik antibodi dan antigen. Berdasarkan cara terjadinya reaksi, ada empat jenis ELISA: ELISA langsung, ELISA tidak langsung, ELISA sandwich, dan ELISA inhibisi. ELISA langsung, tidak langsung dan sandwich adalah jenis ELISA nonkompetitif sedangkan ELISA penghambatan adalah jenis ELISA lengkap. Tujuan utama dari artikel ini adalah untuk membahas perbedaan antara ELISA kompetitif dan nonkompetitif.
Apa itu ELISA Kompetitif?
Competitive ELISA mengukur konsentrasi antigen dalam sampel melalui deteksi gangguan sinyal. Di sini, pengujian menggunakan antigen inhibitor. Oleh karena itu, ini adalah jenis ELISA penghambatan. Selama prosedur ini, antigen yang ada dalam sampel bersaing dengan antigen referensi yang dipilih untuk mengikat sejumlah antibodi berlabel tertentu. Selanjutnya, prosedur ini dimulai dengan inkubasi sampel, dengan kelebihan jumlah antibodi berlabel. Juga, antigen referensi harus dilapisi terlebih dahulu pada pelat uji sumur ganda. Kemudian campuran sampel harus ditambahkan ke pelat uji yang berisi antigen referensi. Antibodi bebas akan mengikat antigen referensi tergantung pada jumlah antigen dalam sampel. Oleh karena itu, jika lebih banyak sampel antigen hadir, lebih sedikit antigen referensi yang akan terdeteksi. Dengan demikian, ini menciptakan sinyal yang lebih lemah.
Gambar 01: ELISA
Sebaliknya, ketika sampel mengandung lebih sedikit antigen, semakin banyak antigen referensi yang akan menempati antibodi dan memberikan sinyal yang kuat. Karena ELISA kompetitif memberikan sinyal yang lebih kuat ketika sampel mengandung jumlah antigen yang rendah, ELISA kompetitif adalah pengujian yang sangat sensitif, bahkan untuk sampel dengan jumlah antigen yang sedikit.
Dalam beberapa kit ELISA kompetitif, antigen berlabel digunakan sebagai pengganti antibodi berlabel. Di sini, antigen berlabel dan antigen sampel akan bersaing untuk mengikat antibodi primer. Demikian pula, ketika jumlah antigen dalam sampel rendah, jumlah antigen berlabel yang mengikat antibodi akan lebih tinggi dan menciptakan sinyal yang lebih kuat.
Apa itu ELISA Nonkompetitif?
Di antara empat jenis ELISA, tiga jenis adalah ELISA nonkompetitif. Mereka adalah ELISA langsung, ELISA tidak langsung, dan ELISA sandwich. Ketiga format bekerja di bawah prinsip umum ELISA dengan sedikit perbedaan dalam metodologinya.
Direct ELISA menggunakan antibodi primer berlabel enzim. Oleh karena itu, tidak memerlukan antibodi sekunder. Oleh karena itu, ELISA langsung lebih cepat daripada jenis ELISA lainnya. Antibodi primer akan langsung berikatan dengan antigen target amobil yang ada di piring. Oleh karena itu, reaksi enzim-substrat akan berlangsung, menghasilkan sinyal yang terlihat.
Gambar 02: Sandwich ELISA
Tidak seperti ELISA langsung, ELISA tidak langsung menggunakan antibodi primer tidak berlabel dan antibodi sekunder berlabel enzim. Setelah antibodi primer mengikat antigen amobil, antibodi sekunder mengikat antibodi primer. Enzim dalam antibodi sekunder akan bereaksi dengan antigen dan menghasilkan sinyal yang terlihat. Sandwich ELISA berbeda dengan ELISA langsung dan tidak langsung. Di sini, antibodi diimobilisasi ke dinding pelat uji.
Apa Persamaan Antara ELISA Kompetitif dan Nonkompetitif?
- ELISA kompetitif dan nonkompetitif adalah dua jenis teknik pengujian imunosorben.
- Mereka adalah teknik yang sangat fleksibel dan sensitif.
- Selanjutnya, ELISA kompetitif dan nonkompetitif adalah enzyme-linked immunoassays.
- Juga, kedua metode menghasilkan sinyal karena reaksi enzim-substrat.
Apa Perbedaan ELISA Kompetitif dan Nonkompetitif?
ELISA Kompetitif adalah jenis ELISA yang mengandalkan penyelesaian antara antigen analit dan antigen berlabel untuk jumlah antibodi spesifik yang terbatas. Di sisi lain, tidak ada kompetisi seperti itu antara antigen yang diinginkan dan antigen referensi dalam ELISA nonkompetitif. Jadi, inilah perbedaan utama antara ELISA kompetitif dan nonkompetitif. Demikian pula, ELISA kompetitif adalah ELISA inhibisi sedangkan ELISA nonkompetitif bukan ELISA inhibisi. Jadi, ini juga perbedaan antara ELISA kompetitif dan nonkompetitif.
Selain itu, ELISA kompetitif lebih cocok untuk mengukur jumlah antigen yang diinginkan. Ini adalah metode yang sensitif. Di sisi lain, ELISA nonkompetitif tidak bergantung pada jumlah antigen yang ada dalam sampel. Oleh karena itu, ini juga merupakan perbedaan antara ELISA kompetitif dan nonkompetitif.
Infografik di bawah ini menjelaskan perbedaan antara ELISA kompetitif dan nonkompetitif secara komparatif.
Ringkasan – ELISA Kompetitif vs Nonkompetitif
ELISA kompetitif dan nonkompetitif adalah dua jenis utama ELISA atau uji imunosorben terkait-enzim. Dalam meringkas perbedaan antara ELISA kompetitif dan nonkompetitif, ELISA kompetitif bergantung pada kompetisi antara antigen yang diinginkan dan antigen referensi terhadap jumlah antibodi yang terbatas. Oleh karena itu, ELISA kompetitif disebut juga sebagai ELISA inhibisi. Di sisi lain, ELISA nonkompetitif tidak bergantung pada kompetisi antara antigen target dan antigen referensi. Ini menggunakan kelebihan antibodi spesifik berlabel terhadap analit yang diinginkan. Jadi, inilah perbedaan utama antara ELISA kompetitif dan nonkompetitif. ELISA langsung, ELISA tidak langsung, dan ELISA sandwich adalah tiga jenis utama ELISA nonkompetitif.
