Perbedaan Kunci – Imunofluoresensi vs Imunohistokimia
Diagnosis penyakit, yang menggunakan metode biologi molekuler, telah menjadi bidang yang baru muncul dalam teknologi laboratorium klinis. Ini mencakup semua tes dan metode untuk mengidentifikasi penyakit dan memahami penyebab penyakit dengan menganalisis DNA, RNA atau protein yang diekspresikan dalam suatu organisme. Kemajuan pesat dalam diagnostik molekuler telah memungkinkan penelitian dasar tentang penyakit menular dan tidak menular. Ini digunakan untuk menentukan perubahan dalam urutan atau tingkat ekspresi dalam gen atau protein penting yang terlibat dalam penyakit. Imunofluoresensi (IF) dan Immunohistochemistry (IHC) adalah dua teknik yang banyak digunakan dalam biologi kanker. IF adalah jenis IHC di mana metode deteksi fluoresensi digunakan untuk menganalisis antibodi monoklonal dan poliklonal, sedangkan IHC menggunakan metode berbasis kimia untuk mendeteksi antibodi monoklonal dan poliklonal. Inilah perbedaan utama antara IF dan IHC.
Apa itu Immunofluorescence (IF)?
Immunofluorescence adalah teknik deteksi di mana antibodi yang digunakan dalam pengujian diberi label menggunakan pewarna fluoresen atau protein fluoresen untuk tujuan deteksi. Antibodi sekunder berlabel dapat menghasilkan sinyal latar belakang yang tidak diinginkan; oleh karena itu, teknik IF didasarkan pada pelabelan antibodi primer itu sendiri saat ini untuk menghindari sinyal yang tidak diinginkan selama deteksi. Melalui teknik ini, ikatan non-spesifik antara antibodi primer dan sekunder dicegah, dan lebih cepat karena tidak ada langkah inkubasi sekunder yang terlibat. Kualitas data juga ditingkatkan.
Gambar 01: Pewarnaan imunofluoresensi ganda untuk BrdU, NeuN, dan GFAP
Fluorochromes atau pewarna fluorescent adalah senyawa yang dapat menyerap radiasi, sebaiknya radiasi ultra violet yang tereksitasi. Ketika partikel mencapai keadaan dasar dari keadaan tereksitasi, mereka memancarkan radiasi yang ditangkap dan dideteksi oleh detektor untuk membentuk spektrum. Sangat penting bahwa label fluoresen kompatibel dan stabil untuk reaksi tertentu dan harus terkonjugasi dengan antibodi untuk mendapatkan hasil yang akurat. Salah satu fluorokrom yang paling banyak digunakan adalah fluorescein isothiocyanate (FITC), yang berwarna hijau, dengan panjang gelombang puncak serapan dan emisi masing-masing 490 nm dan 520 nm. Rhodamin, agen lain yang digunakan dalam IF, berwarna merah dan memiliki panjang gelombang puncak serapan dan emisi yang berbeda dari 553 nm dan 627 nm.
Apa itu Imunohistokimia (IHC)?
IHC adalah metode pengujian molekuler yang dipraktikkan untuk mengidentifikasi dan mengkonfirmasi keberadaan antigen dalam sel target. Sel target dapat berupa partikel infeksius, mikroba patogen, atau sel tumor ganas. IHC menggunakan antibodi monoklonal dan poliklonal untuk menentukan keberadaan antigen yang ada pada permukaan sel sel target. Teknik ini didasarkan pada pengikatan antigen-antibodi. Penanda deteksi dikonjugasikan ke antibodi ini untuk mendeteksi ada atau tidaknya antigen tertentu. Penanda ini dapat berupa penanda kimia seperti enzim, antibodi bertanda fluoresen, atau antibodi berlabel radio.
Gambar 02: Irisan otak tikus diwarnai oleh Imunohistokimia
Aplikasi IHC yang paling populer adalah dalam biologi sel kanker untuk mengidentifikasi keberadaan tumor ganas, tetapi juga digunakan untuk mendeteksi penyakit menular.
Apa Persamaan Antara Imunofluoresensi dan Imunohistokimia?
- Imunofluoresensi dan Imunohistokimia berlangsung dalam kondisi in vitro.
- Kedua teknik didasarkan pada antigen-antibodi
- Keduanya adalah teknik yang sangat cepat.
- Hasil dari teknik ini dapat direproduksi.
- Keduanya telah meningkatkan kualitas data.
- Teknik ini digunakan dalam diagnosis kanker dan penyakit menular.
Apa Perbedaan Antara Imunofluoresensi dan Imunohistokimia?
Imunofluoresensi vs Imunohistokimia |
|
| IF adalah teknik deteksi di mana antibodi yang digunakan dalam pengujian diberi label menggunakan pewarna fluoresen atau protein fluoresen untuk deteksi. | IHC adalah teknik deteksi di mana antibodi yang digunakan dalam pengujian diberi label menggunakan bahan kimia atau elemen radioaktif untuk deteksi. |
| Akurasi | |
| Akurasi lebih tinggi pada teknik IF dibandingkan dengan IHC. | Akurasi lebih rendah di IHC. |
| Kekhususan | |
| JIKA lebih spesifik. | IHC kurang spesifik. |
Ringkasan – Imunofluoresensi vs Imunohistokimia
Mekanisme molekuler telah membawa banyak perubahan di bidang kedokteran, sehingga memunculkan metode pengujian molekuler tingkat lanjut yang telah membawa revolusi di bidang diagnostik. Penemuan-penemuan ini telah menghasilkan identifikasi dan konfirmasi penyakit yang cepat dan akurat, sehingga memungkinkan keberhasilan administrasi dan produksi obat-obatan. Teknik ini juga digunakan dalam farmakologi untuk menemukan target obat dan untuk mengkonfirmasi sifat farmakokinetik obat selama metabolisme obat. IF dan IHC adalah dua metode diagnostik yang didasarkan pada konsep pengikatan antigen dan antibodi, meskipun mode deteksi pada kedua teknik berbeda. IF menggunakan prinsip fluoresensi untuk mendeteksi antigen dan IHC menggunakan konsep konjugasi kimia untuk mendeteksi antigen. Inilah perbedaan antara IF dan IHC.
Unduh Versi PDF Immunofluorescence vs Immunohistochemistry
Anda dapat mengunduh versi PDF dari artikel ini dan menggunakannya untuk tujuan offline sesuai catatan kutipan. Silakan unduh versi PDF di sini Perbedaan Antara Imunofluoresensi dan Imunohistokimia.
