Perbedaan utama antara pewarnaan Coomassie dan perak adalah bahwa pewarnaan coomassie adalah teknik pewarnaan protein yang menggunakan pewarnaan biru cemerlang coomassie, sedangkan pewarnaan sliver adalah teknik pewarnaan protein yang menggunakan pewarnaan perak.
Pemisahan dan identifikasi protein adalah langkah penting dalam analisis proteom. Mereka membutuhkan karakterisasi protein resolusi tinggi setelah elektroforesis gel. Ada banyak teknik pewarnaan yang mencakup pewarnaan yang berbeda seperti pewarna anionik (coomassie briliant blue), kation logam (imidazole-zinc), pewarna perak dan pewarna fluoresen, dll. Kadang-kadang, probe radioaktif juga dapat digunakan. Pemilihan teknik pewarnaan tergantung pada kesederhanaan, ketersediaan peralatan pencitraan di laboratorium, dll.
Apa itu Pewarnaan Coomassie?
Pewarnaan Coomassie adalah teknik pewarnaan protein yang menggunakan pewarna biru cemerlang coomassie. Hal ini umumnya disebut teknik biru coomassie. Coomassie Brilliant Blue adalah pewarna protein anionik yang paling populer. Pewarnaan ini biasanya menodai hampir semua protein dengan linearitas kuantitatif yang baik pada sensitivitas sedang. Pewarnaan Coomassie Brilliant Blue tidak secara spesifik mengikat hampir semua protein. Ada dua varian warna biru cemerlang coomassie yang berbeda: R-250 dan G-250. R-250 menawarkan waktu pewarnaan yang lebih singkat, sedangkan G-250 tersedia dalam formulasi yang lebih sensitif dan ramah lingkungan.
Gambar 01: Pewarnaan Coomassie
Pewarna Coomassie sangat populer dalam studi spektrometri massa dan studi identifikasi protein. Selain itu, pewarna coomassie bio-safe adalah formulasi coomassie blue G-250 yang tidak berbahaya yang saat ini tersedia di pasaran. Keuntungan dari formulasi ini adalah hanya membutuhkan air untuk pembilasan dan destaining. Pewarna coomassie bio-safe menawarkan sensitivitas yang setara dengan coomassie blue G-250 konvensional tetapi lebih baik daripada coomassie stain R-250. Selain itu, ia memiliki protokol pewarnaan yang lebih sederhana dan lebih cepat daripada Coomassie blue G-250 konvensional. Kelemahan dari pewarnaan coomassie blue adalah kurang sensitif dibandingkan dengan pewarnaan perak. Pewarnaan biru coomassie kira-kira 50 kali lipat kurang sensitif dibandingkan pewarnaan perak. Namun, karena kesederhanaannya dalam mengikat, ini lebih disukai di banyak penelitian.
Apa itu Pewarnaan Perak?
Pewarnaan perak adalah teknik pewarnaan protein yang menggunakan pewarnaan perak. Pewarnaan perak digunakan untuk mewarnai gel agarosa dan poliakrilamida. Pewarnaan perak protein dalam gel agarosa pertama kali dikembangkan pada tahun 1973 oleh Kerenyi dan Gallyas. Kemudian, itu diadaptasi untuk protein dalam gel poliakrilamida yang digunakan dalam SDS-PAGE. Saat ini, pewarnaan perak juga digunakan untuk pewarnaan DNA atau RNA. Untuk pewarnaan gel, gel diinkubasi dengan larutan perak nitrat dalam metode ini. Pewarnaan perak menodai situs di mana protein hadir dari coklat ke hitam.
Gambar 02: Pewarnaan Perak
Intensitas pewarnaan perak tergantung pada struktur utama protein. Selain itu, kebersihan wadah yang digunakan dan kemurnian reagen juga dapat mempengaruhi kualitas pewarnaan perak. Namun, kelemahan pewarnaan perak adalah tidak dapat mendeteksi semua protein, terutama glikoprotein dan protein dengan kelompok modifikasi besar yang melekat pada rantai sampingnya.
Apa Persamaan Antara Coomassie dan Pewarnaan Perak?
- Pewarnaan Coomassie dan perak adalah dua teknik yang digunakan dalam pewarnaan protein.
- Mereka dapat menodai protein dan DNA.
- Kedua teknik pewarnaan memiliki kekurangan.
- Teknik ini memiliki langkah-langkah serupa, seperti memperbaiki, mewarnai, dan menghilangkan.
Apa Perbedaan Pewarnaan Coomassie dan Silver?
Pewarnaan Coomassie adalah teknik pewarnaan protein yang menggunakan pewarnaan coomassie briliant blue, sedangkan pewarnaan sliver adalah teknik pewarnaan protein yang menggunakan pewarnaan perak. Jadi, inilah perbedaan utama antara pewarnaan Coomassie dan perak. Selanjutnya, pewarnaan Coomassie kurang sensitif dibandingkan pewarnaan perak.
Infografik di bawah ini mencantumkan perbedaan antara pewarnaan Coomassie dan pewarnaan perak dalam bentuk tabel untuk perbandingan berdampingan.
Ringkasan – Coomassie vs Pewarnaan Perak
Untuk memvisualisasikan protein, reaksi kimia pengikatan zat warna spesifik protein atau penghasil warna dapat dilakukan. Ini disebut pewarnaan protein. Pewarnaan coomassie dan perak adalah dua teknik yang digunakan dalam pewarnaan protein. Teknik pewarnaan coomassie menggunakan pewarnaan coomassie briliant blue sedangkan pewarnaan sliver menggunakan pewarnaan silver. Jadi, inilah perbedaan utama antara pewarnaan Coomassie dan pewarnaan perak.
