Perbedaan utama antara ragi satu hibrida dan ragi dua hibrida adalah bahwa ragi satu hibrida adalah uji berbasis in vitro untuk menganalisis interaksi DNA-protein sementara ragi dua hibrida adalah uji berbasis in vitro untuk menganalisis interaksi protein-protein.
Mempelajari interaksi antara molekul seluler dapat membantu menentukan lokasi pengenalan yang terlibat dalam ekspresi gen dan jalur protein. Interaksi DNA dan protein merupakan bagian integral dari proses seluler seperti modifikasi DNA dan regulasi transkripsi, dll. Di sisi lain, interaksi protein dan protein memainkan peran penting dalam proses seluler seperti replikasi, transkripsi, translasi, dan transduksi sinyal. Oleh karena itu, sangat penting untuk mengidentifikasi interaksi molekul seluler ini melalui pengujian yang berbeda. Ragi satu hibrida dan ragi dua hibrida adalah dua uji berbasis in vitro untuk menganalisis interaksi DNA-protein dan protein-protein.
Apa itu Yeast One Hybrid?
Yeast one hybrid (Y1H) adalah uji berbasis in vitro untuk menganalisis interaksi DNA-protein intraseluler. Metode ini pertama kali didirikan oleh Wang dan Reed pada tahun 1993. Sejak itu, metode ini telah menunjukkan kekuatan yang lebih besar dalam penelitian biologi. Dalam pengujian ini, ada dua komponen utama: umpan DNA dan mangsa protein.
Gambar 01: Ragi Satu Hibrida
Dalam prosedurnya, urutan DNA (umpan DNA) pertama kali dikloning ke hulu dari dua reporter yang berbeda (HIS3, LacZ). Konstruksi reporter ini diintegrasikan ke dalam genom strain ragi. Faktor transkripsi diambil sebagai mangsa protein. Faktor transkripsi digabungkan ke domain aktivasi transkripsi (AD) dari faktor transkripsi Gal4 ragi untuk membuat protein hibrida. Seluruh protein hibrida ini diintegrasikan ke dalam plasmid sebelum dimasukkan ke dalam strain ragi. Setelah pengenalan plasmid rekombinan, ketika faktor transkripsi berinteraksi dengan fragmen DNA, bagian AD mengaktifkan ekspresi gen reporter (HIS3 atau LacZ). Sequencing plasmid memungkinkan identifikasi faktor transkripsi yang dapat mengikat fragmen DNA. Baru-baru ini, metode ragi satu hibrida digunakan untuk meneliti diagnosis penyakit. Oleh karena itu, di masa depan, uji ini akan lebih banyak digunakan dalam penelitian ilmiah dan perawatan medis.
Apa itu Ragi Dua Hibrida?
Yeast two hybrid (Y2H) adalah uji berbasis in vitro untuk menganalisis interaksi protein dan protein intraseluler. Metode ini awalnya ditemukan oleh Stanley Fields dan Ok-Kyu Song pada tahun 1989. Teknik ini mendeteksi interaksi protein-protein menggunakan faktor transkripsi Gal4 ragi.
Gambar 02: Ragi Dua Hibrida
Dalam metode ini, dua fusi (hibrida) pertama dibangun menggunakan protein yang diinginkan: menggabungkan satu protein dengan domain pengikatan DNA (DBD) dan dengan menggabungkan protein lainnya dengan domain aktivator (AD) dari faktor transkripsi Gal4. Protein yang menyatu dengan DBD dikenal sebagai umpan sedangkan protein yang menyatu dengan AD dikenal sebagai mangsa. Dalam strain ragi, pada interaksi umpan dan mangsa, DBD dan AD didekatkan untuk menghasilkan faktor transkripsi Gal4 fungsional di hulu gen reporter. Faktor transkripsi fungsional mengaktifkan ekspresi gen reporter. Selanjutnya, metode ini saat ini digunakan untuk menyaring interaksi protein membran integral dalam sel mamalia.
Apa Persamaan Antara Ragi Satu Hibrida dan Ragi Dua Hibrida?
- Ragi satu hibrida dan ragi dua hibrida adalah dua uji berbasis in vitro untuk menganalisis interaksi DNA-protein dan protein-protein.
- Pengujian ini menggunakan strain ragi.
- Kedua pengujian menggunakan domain aktivasi (AD) dari faktor transkripsi Gal4.
- Mereka menggunakan ekspresi gen reporter (HIS3, atau LacZ) untuk mendeteksi interaksi.
- Mereka memiliki umpan dan mangsa.
- Kedua tes sangat berguna dalam penelitian biologi modern.
Apa Perbedaan Antara Ragi Satu Hibrida dan Ragi Dua Hibrida?
Yeast one hybrid assay berbasis in vitro untuk menganalisis interaksi DNA dan protein, sedangkan yeast two hybrid adalah assay berbasis in vitro untuk menganalisis interaksi protein dan protein. Jadi, inilah perbedaan utama antara ragi satu hibrida dan ragi dua hibrida. Selanjutnya, dalam ragi satu hibrida, umpan adalah fragmen DNA, dan mangsa adalah molekul protein. Di sisi lain, dalam ragi dua hibrida, baik umpan dan mangsa adalah molekul protein.
Infografik di bawah ini mencantumkan perbedaan antara ragi satu hibrida dan ragi dua hibrida dalam bentuk tabel untuk perbandingan berdampingan.
Ringkasan – Ragi Satu Hibrida vs Ragi Dua Hibrida
Ragi satu hibrida dan ragi dua hibrida adalah dua pengujian berbasis in vitro yang penting. Ragi satu hibrida adalah uji berbasis in vitro untuk menganalisis interaksi DNA dan protein sedangkan ragi dua hibrida adalah uji berbasis in vitro untuk menganalisis interaksi protein dan protein. Jadi, inilah perbedaan utama antara ragi satu hibrida dan ragi dua hibrida.
