Perbedaan utama antara gradien sukrosa dan ultrasentrifugasi bantalan sukrosa adalah bahwa dalam ultrasentrifugasi gradien sukrosa, gradien sukrosa kontinu digunakan, sedangkan pada ultrasentrifugasi bantalan sukrosa, gradien sukrosa diskontinu digunakan.
Generasi sukrosa dan ultrasentrifugasi bantalan sukrosa adalah dua jenis teknik serupa yang digunakan untuk memisahkan jenis makromolekul tertentu. Dalam kedua teknik, gradien kerapatan sukrosa digunakan. Tetapi dalam ultrasentrifugasi gradien sukrosa, gradien kerapatan kontinu digunakan, sedangkan pada ultrasentrifugasi bantalan sukrosa, gradien kerapatan diskontinu digunakan.
Apa itu Ultrasentrifugasi Gradien Sukrosa?
Ultrasentrifugasi gradien sukrosa adalah teknik yang dapat digunakan untuk fraksinasi makromolekul seperti DNA, RNA, dan protein. Ada beberapa langkah dalam teknik ini. Mereka adalah persiapan gradien sukrosa, sentrifugasi, pemisahan dan elusi. Persiapan gradien adalah langkah kunci dalam teknik ini. Dalam teknik ini, sampel yang mengandung makromolekul dengan ukuran berbeda dilapiskan pada permukaan kolom gradien sukrosa. Saat sentrifugasi, makromolekul berukuran berbeda mengendap melalui kolom gradien sukrosa pada tingkat yang berbeda. Sedimentasi tergantung pada beberapa faktor, termasuk gaya sentrifugasi, bentuk ukuran dan densitas makromolekul, densitas dan viskositas gradien. Pada akhir sentrifugasi, makromolekul dipisahkan secara spasial oleh kepadatan. Makromolekul yang lebih besar (makromolekul densitas tinggi) mengendap ke arah bawah. Yang lebih ringan (makromolekul berdensitas rendah) tetap berada di puncak gradien. Oleh karena itu, molekul terpisah sebagai pita yang berbeda. Kemudian pita harus dipisahkan, dan pemurnian makromolekul spesifik dari sukrosa harus dilakukan.
Gambar 01: Ultrasentrifugasi Gradien Sukrosa
Di sisi aplikasi, metode ini banyak digunakan untuk fraksinasi molekul DNA. Ultrasentrifugasi gradien sukrosa umumnya digunakan untuk mengkarakterisasi ukuran dan komposisi kompleks protein. Selain itu, teknik ini digunakan untuk pemurnian parsial mRNA.
Apa itu Ultrasentrifugasi Bantalan Sukrosa?
Ultrasentrifugasi bantalan sukrosa adalah teknik lain yang memungkinkan fraksinasi makromolekul. Tidak seperti ultrasentrifugasi gradien densitas sukrosa, ultrasentrifugasi bantalan sukrosa menggunakan gradien densitas diskontinyu. Konsentrasi sukrosa meningkat dari atas ke bawah dalam langkah-langkah diskrit. Dalam teknik ini, pemisahan dicapai dengan menempatkan ekstrak yang telah dijernihkan di atas sejumlah kecil larutan sukrosa dalam tabung sentrifus, yang disebut bantalan sukrosa. Hal ini memungkinkan pemisahan yang lebih baik dalam sentrifugasi berkecepatan tinggi. Ketika molekul terpisah sebagai pita antara bantalan sukrosa, pita putih dapat dikumpulkan dan dimurnikan. Selain itu, kotoran dapat dihilangkan lebih lanjut menggunakan metode bantalan sukrosa. Metode bantalan sukrosa memungkinkan 60-70% tabung diisi dengan sampel. Oleh karena itu, metode bantalan sukrosa memungkinkan volume sampel yang lebih besar untuk diproses.
Apa Persamaan Antara Gradien Sukrosa dan Ultrasentrifugasi Bantalan Sukrosa?
- Sukrosa gradien dan ultrasentrifugasi bantalan sukrosa adalah dua teknik yang digunakan untuk memisahkan campuran makromolekul.
- Dalam kedua metode, gradien sukrosa digunakan.
- Sentrifugasi adalah langkah dalam kedua metode.
- Molekul mengendap sebagai pita atau zona di setiap metode.
Apa Perbedaan Antara Gradien Sukrosa dan Ultrasentrifugasi Bantalan Sukrosa?
Ultrasentrifugasi gradien sukrosa adalah teknik yang menggunakan gradien sukrosa kontinu dalam tabung sentrifugasi sedangkan ultrasentrifugasi bantalan sukrosa adalah teknik yang menggunakan gradien sukrosa terputus-putus. Jadi, inilah perbedaan utama antara gradien sukrosa dan ultrasentrifugasi bantalan sukrosa.
Selain itu, ultrasentrifugasi bantalan sukrosa memungkinkan volume sampel yang lebih besar untuk diproses sementara ultrasentrifugasi gradien sukrosa memungkinkan volume sampel yang relatif rendah untuk diproses.
Di bawah ini infografik mentabulasi lebih banyak perbedaan antara gradien sukrosa dan ultrasentrifugasi bantalan sukrosa.
Ringkasan – Gradien Sukrosa vs Ultrasentrifugasi Bantalan Sukrosa
Ultrasentrifugasi gradien sukrosa memisahkan makromolekul menggunakan gradien sukrosa kontinu. Sebaliknya, ultrasentrifugasi bantalan sukrosa menggunakan gradien sukrosa terputus-putus untuk memisahkan jenis partikel tertentu dalam campuran. Jadi, inilah perbedaan utama antara gradien sukrosa dan ultrasentrifugasi bantalan sukrosa. Metode bantalan sukrosa memungkinkan pengumpulan partikel yang utuh secara morfologis karena tidak menyebabkan tekanan mekanis, tidak seperti ultrasentrifugasi gradien sukrosa, yang menghancurkan molekul ke bagian bawah tabung. Selain itu, ultrasentrifugasi bantalan sukrosa memungkinkan volume sampel yang lebih besar untuk diproses daripada ultrasentrifugasi gradien sukrosa.
