Perbedaan Kunci – HPLC vs HPTLC
Perbedaan utama antara HPLC dan HPTLC adalah bahwa HPLC memungkinkan pemisahan kuantitatif komponen dalam sampel sedangkan HPTLC tidak memungkinkan pemisahan kuantitatif komponen dalam sampel.
Kromatografi adalah metode pemisahan fisik yang digunakan untuk memisahkan dan mengidentifikasi komponen dalam suatu campuran. Baik HPLC dan HPTLC adalah teknik kromatografi. HPLC adalah kromatografi cair kinerja tinggi. HPTLC adalah kromatografi lapis tipis kinerja tinggi.
Apa itu HPLC?
HPLC adalah kromatografi cair kinerja tinggi. Ini adalah teknik analisis yang digunakan untuk memisahkan, mengidentifikasi dan mengukur komponen dalam campuran. Dalam teknik ini, sampel dilarutkan dalam pelarut yang sesuai. Kemudian pelarut dengan sampel dilewatkan melalui pompa dengan tekanan tertentu. Pompa diisi dengan bahan adsorben padat. Kemudian beberapa komponen mengikat kuat pada bahan penyerap sedangkan komponen lain mengikat secara longgar. Hal ini menyebabkan komponen memiliki laju aliran yang berbeda melalui pompa. Oleh karena itu, komponen dapat dipisahkan dengan mudah.
Gambar 01: Sistem HPLC
Bahan adsorben yang mengisi pompa dikenal sebagai fase diam. Pelarut dengan sampel terlarut dikenal sebagai fase gerak. Pompa yang digunakan dalam teknik ini disebut kolom. Kolom diisi dengan bahan penyerap, paling umum, partikel silika. Ukuran partikel ini dapat berkisar antara 2-50 m. Proses pemisahan dipengaruhi oleh komposisi fase gerak dan suhu sistem. Interaksi fase diam dengan komponen dalam sampel dapat berupa interaksi hidrofobik, interaksi dipol-dipol, ikatan ion, dll.
Tekanan operasi HPLC jauh lebih tinggi daripada kromatografi cair tradisional. Itu terletak sekitar 50-350 bar. Perbedaan antara kromatografi cair dan HPLC adalah bahwa dalam kromatografi cair, sampel jatuh melalui kolom di bawah gravitasi sedangkan, di HPLC, sampel ditekan melalui kolom. Ukuran kolom dan partikel penyerap juga sangat kecil jika dibandingkan dengan kromatografi cair tradisional. Namun, resolusi yang diberikan oleh teknik HPLC lebih unggul.
Apa itu HPTLC?
HPTLC adalah kromatografi lapis tipis kinerja tinggi. Ini adalah bentuk TLC tradisional yang canggih dan otomatis. Teknik ini memberikan resolusi yang efisien pada periode waktu yang singkat. Dalam metode analisis ini, sampel dan referensi dapat dianalisis secara bersamaan, yang memungkinkan sampel untuk dibandingkan dengan referensi. Ini memberikan akurasi analitik yang lebih baik daripada teknik kromatografi lainnya. Waktu yang dibutuhkan untuk analisis lebih sedikit. Tekniknya adalah teknik berbiaya rendah.
Gambar 02: Analisis Pewarna Makanan Menggunakan HPTLC
Metode HPTLC adalah proses yang sederhana, dan langkah preparasi sampel juga dihilangkan (Dalam KLT tradisional, langkah preparasi sampel disertakan sebelum pemisahan. Langkah ini melibatkan pembersihan dan pengayaan). Pelarut dapat digunakan secara langsung tanpa pra-perlakuan meskipun teknik kromatografi lainnya memerlukan pra-perawatan seperti degassing, filtrasi, dll.
Bahan adsorben yang digunakan dalam HPTLC adalah silika dengan ukuran partikel yang sangat kecil. Dalam KLT tradisional, ukuran partikel silika adalah 5-20 m sedangkan pada HPTLC, adalah 4-8 m. Sampel diaplikasikan pada pelat HPTLC menggunakan aplikator. Ini memberikan aplikasi yang seragam dan aman. Kemudian pelat ditempatkan dalam ruang yang memiliki fase gerak. Ruang harus jenuh dengan uap fase gerak. Setelah proses HPTLC, noda-noda yang berpindah dapat dideteksi. Saat mendeteksi bintik-bintik di piring, teknik HPTLC menggunakan wilayah UV yang sesuai atau ruang yodium.
Apa Perbedaan HPLC dan HPTLC?
HPLC vs HPTLC |
|
| HPLC adalah kromatografi cair kinerja tinggi. | HPTLC adalah kromatografi lapis tipis kinerja tinggi. |
| Teknik | |
| Dalam HPLC, fase gerak dengan pelarut dilewatkan melalui kolom yang diisi dengan fase diam. | Dalam HPTLC, sampel terlihat pada pelat KLT dan ditempatkan di dalam ruang yang berisi fase gerak; kemudian sampel dibiarkan bermigrasi ke atas pelat bersama dengan fase gerak. |
| Pengukuran | |
| Dalam HPLC, perbedaan antara laju aliran komponen melalui kolom digunakan untuk memisahkan komponen dalam sampel. | Dalam HPTLC, perbedaan jarak yang ditempuh oleh setiap komponen dalam sampel digunakan untuk memisahkan komponen dalam sampel. |
| Pemisahan Kuantitatif | |
| HPLC memungkinkan pemisahan kuantitatif komponen dalam sampel. | HPTLC tidak mengizinkan pemisahan kuantitatif komponen dalam sampel. |
Ringkasan – HPLC vs HPTLC
HPLC dan HPTLC adalah dua teknik kromatografi. Perbedaan utama antara HPLC dan HPTLC adalah bahwa HPLC memungkinkan pemisahan kuantitatif komponen dalam sampel sedangkan HPTLC tidak memungkinkan pemisahan kuantitatif komponen dalam sampel.
