Perbedaan Kunci – Phusion vs Taq Polymerase
DNA polimerase adalah enzim yang banyak digunakan dalam teknik biologi molekuler dan juga secara alami ada di semua organisme yang menjalani replikasi DNA. Mereka adalah enzim polimerisasi kunci yang terlibat selama replikasi. DNA polimerase mampu menambahkan nukleotida ke ujung 3’ bebas untai DNA sehingga menyebabkan perpanjangan untai baru. Saat ini, karena perkembangan biologi molekuler dalam diagnostik penyakit dan aplikasi industri, penting untuk membuat polimerase yang memiliki berbagai sifat yang bermanfaat. Ini meningkatkan akurasi metode dan menjadikannya teknik yang lebih cepat. Phusion dan Taq polimerase adalah dua enzim polimerase termostabil yang diproduksi secara komersial yang digunakan dalam aplikasi molekuler khusus. Phusion adalah polimerase DNA yang diisolasi dari Pyrococcus furiosus dan terutama digunakan dalam eksperimen kloning untuk meningkatkan kesetiaan. Taq DNA Polymerase adalah DNA polimerase standar yang digunakan dalam Polymerase Chain Reaction (PCR), dan diisolasi dari bakteri termostabil; Termus akuatik. Perbedaan utama antara kedua enzim adalah sumber mikroorganisme. Phusion diisolasi dari ekstrofil, Pyrococcus furiosus sedangkan, Taq polimerase diisolasi dari termofil, Thermus aquaticus.
Apa itu Phusion?
Phusion DNA polimerase adalah polimerase baru yang diproduksi dengan mengisolasi enzim dari Pyrococcus furiosus, yang merupakan Archaea yang ekstrim. Mikroba ini berada dalam kondisi suhu yang sangat tinggi, sehingga membuat polimerase menjadi polimerase yang sangat stabil terhadap panas. Phusion polimerase digunakan untuk mendapatkan kesetiaan yang ekstrim atas polimerase termostabil konvensional; Taq polimerase. Phusion polimerase mampu memperkuat templat panjang hingga 7,5 kb DNA genom. Kapasitas polimerisasi optimal Phusion polimerase adalah pada 720 C. Phusion juga digunakan dalam produk kloning untuk pengurutan, analisis ekspresi, dan analisis mutasi.
Phusion DNA polimerase memiliki aktivitas eksonuklease 3’ – 5’. Hal ini memungkinkan proofreading untai yang baru disintesis setelah sintesis. Oleh karena itu, ketidakcocokan nukleotida mudah diperbaiki. Dengan demikian, ia memiliki tingkat kesalahan yang lebih rendah. Keuntungan keseluruhan dari Phusion polimerase adalah;
- Kesetiaan Ekstrim
- Kecepatan Tinggi dan pengurangan waktu perpanjangan
- Reaksi Kuat dan membutuhkan optimasi minimal
- Hasil Tinggi
Gambar 01: Phusion
Kerugian utama Phusion polimerase adalah bahwa hal itu dihambat dengan adanya deoxyuridine triphosphate (dUTP). Ketika dUTP terakumulasi dalam campuran reaksi, dapat menghambat aksi Phusion polimerase. Hal ini dicegah dengan memperlakukan campuran reaksi dengan dUTPase sebelum menambahkan enzim. Saat ini, varian Phusion polimerase yang tahan dUTP yang dikenal sebagai Pfu Turbo digunakan sebagai pengganti Phusion polimerase sebagai obat untuk masalah ini.
Apa itu Taq Polimerase?
Penemuan Taq DNA polimerase telah merevolusi bidang biologi molekuler. Ini memecahkan masalah utama dalam amplifikasi DNA. Taq DNA polimerase adalah enzim polimerase stabil panas yang diekstraksi dan diisolasi dari bakteri termofilik, Thermus aquaticus. Penemuan enzim ini mengarah pada pengembangan PCR. Enzim ini telah memungkinkan penggunaan reaksi berantai polimerase dalam amplifikasi DNA daripada teknik kloning konvensional yang melelahkan. PCR sekarang digunakan dalam diagnostik molekuler, bidang pertanian dan industri dengan banyak variasi baru ditambahkan ke teknik ini.
Gambar 02: Taq Polimerase
Taq DNA polimerase berfungsi pada kisaran suhu optimal antara 720C – 800C. Taq DNA polimerase membutuhkan kofaktor; magnesium untuk fungsinya. Taq polimerase tidak memiliki kemampuan proofreading 3' – 5', oleh karena itu, tingkat kesalahan Taq DNA polimerase tinggi dibandingkan dengan jenis DNA polimerase yang lebih baru seperti Phusion polimerase dll. Namun, popularitas Taq DNA polimerase tetap menjadi sama di seluruh dunia sains karena kemudahan dan fleksibilitas enzim.
Apa Persamaan Antara Phusion dan Taq polimerase?
- Enzim Phusion dan Taq polimerase keduanya merupakan enzim polimerisasi yang mampu menambahkan nukleotida ke ujung bebas 3 untai DNA.
- Baik Phusion dan Taq polimerase memerlukan urutan primer untuk memulai polimerisasi.
- Kedua polimerase Phusion dan Taq stabil terhadap panas.
- Baik Phusion dan Taq polimerase digunakan dalam mekanisme PCR untuk mengamplifikasi DNA.
- Saat menambahkan polimerase ke dalam campuran reaksi, kedua polimerase Phusion dan Taq ditambahkan terakhir untuk memastikan efisiensi enzim.
- Kedua polimerase Phusion dan Taq disintesis secara komersial untuk tujuan eksperimen biologi molekuler.
- Baik Phusion dan Taq polimerase membutuhkan kofaktor untuk menyelesaikan fungsinya.
Apa Perbedaan Phusion dan Taq Polymerase?
Phusion vs Taq Polimerase |
|
| Phusion adalah DNA polimerase yang diisolasi dari Pyrococcus furiosus dan terutama digunakan dalam eksperimen kloning untuk meningkatkan kesetiaan. | Taq DNA Polymerase adalah DNA polimerase standar yang digunakan dalam Polymerase Chain Reaction (PCR), dan diisolasi dari bakteri termostabil, Thermus aquaticus. |
| Organisme Sumber | |
| Phusion diekstrak dari archaea extremophilic – Pyrococcus furiosus. | Karya sastra ini terbentang dari masa penjajahan hingga masa dekolonisasi. |
| Kemampuan Membaca Bukti | |
| 3' – kemampuan membaca bukti 5' hadir di Phusion. | 3' - 5' kemampuan membaca bukti tidak ada di Taq polimerase. |
| Kesetiaan | |
| Fidelitas tinggi ada di sana dengan Phusion. | Taq polimerase menunjukkan fidelitas yang rendah. |
| Amplifikasi | |
| Phusion mampu mengamplifikasi fragmen DNA yang panjang. | Taq polimerase mampu mengamplifikasi fragmen DNA yang jauh lebih pendek. |
| dUTP Keracunan | |
| Aksi phusion dihambat oleh akumulasi ganjil. | Taq polimerase tidak dihambat oleh dUPT. |
Ringkasan – Phusion vs Taq polimerase
Phusion dan Taq DNA polimerase adalah dua polimerase stabil panas yang digunakan dalam teknik PCR. Phusion adalah polimerase yang diisolasi dari ekstrofil, Pyrococcus furiosus sedangkan, Taq diisolasi dari bakteri termostabil Thermus aquaticus. Penemuan Taq DNA polimerase mengarah pada penemuan PCR. Phusion memiliki banyak keunggulan dibandingkan Taq yang menjadikan Phusion pilihan yang lebih baik dalam menghasilkan DNA dengan ketelitian tinggi. Namun, Taq polimerase masih digunakan sebagai enzim polimerase standar dalam PCR. Inilah perbedaan antara Phusion dan Taq polimerase.
