Perbedaan Kunci – Pewarnaan Gram vs Cepat Asam
Bakteri adalah mikroorganisme yang sangat kecil. Mereka transparan, dan deteksi mereka sulit di bawah kondisi hidup dan tidak ternoda. Dengan demikian, berbagai metode pewarnaan dikembangkan untuk memfasilitasi deteksi bakteri. Ada tiga jenis teknik pewarnaan utama: pewarnaan sederhana, pewarnaan diferensial, dan pewarnaan struktural. Pewarnaan diferensial adalah teknik yang menggunakan lebih dari satu pewarnaan untuk membedakan bakteri. Pewarnaan Gram dan pewarnaan tahan asam paling dikenal sebagai pewarnaan diferensial. Pewarnaan Gram adalah teknik pewarnaan diferensial, yang memisahkan bakteri menjadi dua kelompok yang dikenal sebagai bakteri Gram-positif dan bakteri Gram-negatif. Pewarnaan tahan asam adalah pewarnaan diferensial yang digunakan untuk mengidentifikasi organisme tahan asam seperti Mycobacterium dari organisme yang tidak tahan asam. Inilah perbedaan utama antara pewarnaan Gram dan pewarnaan Acid Fast.
Apa itu Pewarnaan Gram?
Pewarnaan Gram adalah teknik pewarnaan diferensial penting yang digunakan untuk identifikasi bakteri dalam mikrobiologi. Teknik ini diperkenalkan oleh Ahli Bakteriologi Denmark Hans Christian Gram pada tahun 1884. Pewarnaan Gram mengkategorikan bakteri ke dalam dua kelompok besar bernama gram positif dan gram negatif, yang sangat penting dalam klasifikasi dan identifikasi bakteri. Ahli mikrobiologi melakukan pewarnaan gram sebagai langkah awal dalam karakterisasi bakteri selama studi mereka.
Bakteri dikelompokkan berdasarkan perbedaan dinding selnya. Bakteri gram positif terdiri dari lapisan peptidoglikan tebal di dinding selnya sedangkan bakteri gram negatif terdiri dari lapisan peptidoglikan tipis di dinding selnya. Hasil pewarnaan gram akan didasarkan pada perbedaan ketebalan lapisan peptidoglikan dinding sel.
Pewarnaan gram dilakukan dengan menggunakan empat reagen yang berbeda yaitu; pewarna primer, mordan, zat penghilang warna, dan pewarna penghitung. Kristal violet dan safranin digunakan sebagai pewarna primer dan counter, sedangkan gram yodium dan alkohol 95% digunakan sebagai mordan dan penghilang warna. Langkah-langkah dasar pewarnaan gram adalah sebagai berikut;
- Apusan bakteri disiapkan pada kaca objek yang bersih, difiksasi dengan panas dan didinginkan.
- Smear dibanjiri kristal violet selama 1 – 2 menit.
- Smear dibilas dengan air keran yang mengalir lambat untuk menghilangkan noda berlebih.
- Gram yodium dioleskan ke apusan selama 1 menit.
- Smear dibilas dengan air keran yang mengalir perlahan
- Smear dicuci dengan alkohol 95% selama 2 – 5 detik dan dibilas dengan air keran yang mengalir perlahan.
- Smear diwarnai dengan safranin selama 1 menit
- Smear dibilas dengan air keran yang mengalir lambat, dikeringkan dan diamati di bawah mikroskop.
Pada akhir pewarnaan gram, bakteri gram negatif akan terlihat berwarna pink sedangkan bakteri gram positif akan berwarna ungu.
Gambar 01: Bakteri Gram negatif dan Gram positif
Hasil pewarnaan gram ditentukan oleh ketebalan lapisan peptidoglikan di dinding selnya. Selama tahap penghilangan warna, noda primer dan mordan mudah dihilangkan dari bakteri gram negatif dan menjadi tidak berwarna karena memiliki lapisan peptidoglikan yang tipis. Pewarnaan primer dipertahankan pada bakteri gram positif karena mereka memiliki lapisan peptidoglikan yang tebal. Pewarnaan counter tidak akan efektif untuk bakteri gram positif karena retensi dari pewarna primer. Dengan demikian, bakteri gram positif akan terlihat pada pewarnaan primer yaitu warna ungu. Pewarnaan counter akan menodai bakteri gram negatif, dan mereka akan terlihat dalam warna pilih, yaitu warna safranin. Oleh karena itu, mudah untuk mengkategorikan bakteri menjadi dua kelompok berdasarkan pewarnaan gram dan sangat berharga dalam diferensiasi dan identifikasi bakteri.
Apa itu Acid Fast?
Tahan luntur asam adalah sifat fisik bakteri tertentu, khususnya ketahanannya terhadap dekolorisasi oleh asam selama prosedur pewarnaan. Setelah diwarnai, organisme ini menolak asam encer dan atau prosedur penghilangan warna berbasis etanol yang umum di banyak protokol pewarnaan. Dengan demikian, nama 'puasa asam' diberikan kepada organisme tersebut. Sifat ini ditunjukkan karena memiliki bahan lilin tingkat tinggi (asam mikolat) di dinding selnya. Tes ini sangat penting untuk identifikasi Mycobacterium tuberculosis.
Gambar 2: Mycobacteria Tahan Asam
Pewarnaan tahan asam ini dikembangkan oleh Paul Ehrlich pada tahun 1882. Teknik tahan asam Ehrlich dimodifikasi oleh Ziehl-Neelsen dan sekarang lebih sering digunakan. Prosedur pewarnaan tahan asam melibatkan tiga reagen yang berbeda. Karbol fuschin digunakan sebagai pewarna utama. Alkohol asam digunakan sebagai zat penghilang warna. Methylene Blue digunakan sebagai counter stain. Prosedur pewarnaan dilakukan sebagai berikut.
- Pewarnaan utama (karbol fuchsin) diterapkan pada spesimen tetap pada slide (Semua sel akan diwarnai dengan warna merah).
- Slide dipanaskan dengan mengukus selama 5 menit, yang mendorong noda ke dalam sel dengan benar.
- Kemudian larutan penghilang warna ditambahkan (Ini menghilangkan pewarna merah dari semua sel kecuali bakteri tahan asam).
- Methylene blue ditambahkan sebagai counter stain (Ini mewarnai semua sel bakteri yang tidak berwarna).
- Bakteri tahan asam tetap berwarna merah sedangkan bakteri tahan asam berwarna biru.
Apa Persamaan Antara Pewarnaan Gram dan Tahan Asam?
- Pewarnaan Gram dan tahan Asam adalah dua teknik pewarnaan diferensial.
- Kedua teknik mengkategorikan bakteri menjadi dua kelompok.
- Kedua teknik menggunakan dua noda dan satu penghilang warna.
Apa Perbedaan Antara Pewarnaan Gram dan Tahan Asam?
Pewarnaan Gram vs Asam Cepat |
|
| Pewarnaan Gram adalah teknik pewarnaan diferensial, yang memisahkan bakteri menjadi dua kelompok bakteri Gram-positif dan bakteri Gram-negatif. | Pewarnaan Tahan Asam adalah pewarnaan diferensial yang digunakan untuk mengidentifikasi organisme tahan asam dari organisme yang tidak tahan asam. |
| Noda Primer | |
| Crystal violet adalah pewarna utama yang umum digunakan dalam pewarnaan gram. | Carbol fuchsin adalah pewarna utama yang digunakan dalam tahan asam. |
| Agen Penghilang Warna | |
| 95% alkohol digunakan sebagai zat penghilang warna pada pewarnaan gram. | Asam alkohol digunakan sebagai zat penghilang warna dalam tahan asam. |
| Penghitung Noda | |
| Pewarnaan Gram menggunakan safranin sebagai counter stain. | Pewarnaan tahan asam menggunakan methylene blue sebagai counter stainnya. |
| Pengamatan | |
| Bakteri gram negatif diamati dalam warna pilih dan bakteri gram positif diamati dalam warna ungu. | Bakteri tahan asam terlihat berwarna merah dan bakteri tahan asam berwarna biru. |
Ringkasan – Gram Stain vs Acid Fast
Visualisasi mikroorganisme dalam keadaan hidup sulit dilakukan. Oleh karena itu, pewarnaan biologis dan prosedur pewarnaan digunakan secara luas untuk mempelajari sifat-sifatnya. Pewarnaan diferensial merupakan salah satu jenis teknik pewarnaan yang digunakan untuk membedakan bakteri. Pewarnaan Gram dan pewarnaan tahan asam adalah dua teknik pewarnaan diferensial. Pewarnaan gram membedakan bakteri gram negatif dan bakteri gram positif berdasarkan ketebalan dinding selnya. Pewarnaan tahan asam membedakan bakteri tahan asam dengan bakteri tidak tahan asam berdasarkan kandungan asam mikolat pada dinding selnya. Inilah perbedaan antara tahan asam dan pewarnaan gram.
Unduh Versi PDF Gram Stain vs Acid Fast
Anda dapat mengunduh versi PDF dari artikel ini dan menggunakannya untuk tujuan offline sesuai catatan kutipan. Silahkan download versi PDF disini Perbedaan Antara Gram Stain dan Acid Fast.
