Perbedaan utama antara RP HPLC dan HIC adalah bahwa RP HPLC menggunakan fase gerak yang lebih polar dan fase diam yang kurang polar. Sedangkan, HIC menggunakan fase diam hidrofobik yang memungkinkan molekul hidrofobik menempel padanya.
Kromatografi adalah teknik analisis yang membantu memisahkan campuran menjadi komponen-komponennya. Pertama, kita harus melarutkan sampel untuk dipisahkan menjadi larutan. Campuran larutan-zat ini disebut fase gerak. Kemudian fase gerak dilewatkan melalui bahan lain yang disebut fase diam. Fase diam menentukan pemisahan komponen. Pemisahan terjadi karena adanya partisi material antara fase gerak dan fase diam.
Apa itu RP HPLC?
Istilah RP HPLC adalah singkatan dari Reverse Phase High-Performance Liquid Chromatography. Ini melibatkan pemisahan komponen dalam campuran, menurut hidrofobisitas. Komponen hidrofobik pada fase gerak berikatan dengan ligan hidrofobik amobil pada fase diam, sedangkan komponen hidrofilik terelusi melalui fase diam tanpa menempel pada permukaan fase diam.
Gambar 01: Perangkat HPLC
Selain itu, metode ini memiliki reproduktifitas yang lebih tinggi dibandingkan dengan teknik kromatografi lainnya, dan juga menunjukkan penerapan yang luas. Oleh karena itu, kami menggunakan metode ini di laboratorium untuk lebih dari 75% dari semua metode HPLC. Sebagian besar waktu, kami menggunakan campuran air dengan pelarut organik polar yang dapat bercampur sebagai fase gerak. Dengan demikian, akan memastikan penempelan komponen hidrofobik dalam larutan ke permukaan fase diam.
Apa itu HIC?
Istilah HIC adalah singkatan dari Hydrophobic Interaction Chromatography. Ini adalah jenis HPLC fase terbalik, dan metode ini digunakan terutama untuk pemisahan biomolekul besar seperti protein. Dalam metode ini, kita perlu menggunakan media berair untuk membuat sampel biomolekul. Karena pelarut organik dapat menyebabkan denaturasi protein. Selain itu, teknik ini menggunakan interaksi antara molekul besar dengan permukaan fase diam yang sedikit hidrofobik. Selanjutnya, kita harus menggunakan konsentrasi garam yang tinggi dalam sampel karena mendorong protein untuk tertahan pada kemasan; proses ini disebut s alting out. Dengan mengurangi konsentrasi garam secara bertahap, kita dapat membuat biomolekul terelusi secara terpisah sesuai dengan hidrofobisitasnya.
Biasanya, metode ini menggunakan kondisi yang berlawanan dengan kromatografi penukar ion. Dalam teknik ini, pertama, kita perlu melewatkan larutan buffer melalui kolom untuk mengurangi kelarutan zat terlarut dalam sampel. Itu membuat daerah hidrofobik protein terekspos. Namun, ketika molekul lebih hidrofobik, lebih sedikit garam yang dibutuhkan untuk mendorong pengikatan. Di sini, zat terlarut yang kurang hidrofobik dielusi terlebih dahulu, dan menurut perubahan konsentrasi garam, zat terlarut yang lebih hidrofobik dielusi terakhir.
Apa Perbedaan RP HPLC dan HIC?
Kromatografi adalah teknik analisis untuk pemisahan komponen dalam campuran. RP HPLC dan HIC adalah dua teknik kromatografi khusus. Perbedaan utama antara RP HPLC dan HIC adalah bahwa RP HPLC menggunakan fase gerak yang lebih polar dan fase diam yang kurang polar, sedangkan HIC menggunakan fase diam hidrofobik, yang memungkinkan molekul hidrofobik menempel padanya.
Infografik di bawah ini merangkum perbedaan antara RP HPLC dan HIC.
Ringkasan – RP HPLC vs. HIC
Kromatografi adalah teknik analisis untuk pemisahan komponen dalam campuran. RP HPLC dan HIC adalah dua teknik kromatografi khusus. Perbedaan utama antara RP HPLC dan HIC adalah bahwa RP HPLC menggunakan fase gerak yang lebih polar dan fase diam yang kurang polar, sedangkan HIC menggunakan fase diam hidrofobik, yang memungkinkan molekul hidrofobik untuk menempel padanya.
