Perbedaan Kunci – Elektroforesis Gel Horisontal vs Vertikal
Gel elektroforesis adalah teknik laboratorium yang digunakan dalam genetika untuk memisahkan campuran yang mengandung DNA, RNA, dan protein lain sesuai dengan muatan dan ukuran molekulnya masing-masing. DNA, RNA atau protein yang perlu dipisahkan dalam metode ini dijalankan melalui gel yang mengandung pori-pori kecil. Molekul didorong melalui gel oleh medan listrik. Molekul melewati pori-pori gel, dan kecepatan gerakan berbanding terbalik dengan panjangnya masing-masing. Oleh karena itu, molekul dengan ukuran molekul yang lebih rendah akan bergerak lebih cepat daripada molekul dengan berat molekul yang lebih tinggi. Medan listrik dihasilkan oleh perbedaan muatan pada dua ujung gel. Salah satu ujungnya mengandung muatan positif, dan ujung lainnya mengandung muatan negatif. Karena molekul DNA dan RNA bermuatan negatif, mereka akan tertarik ke arah ujung gel yang bermuatan positif. Elektroforesis gel dapat terdiri dari dua metode yang berbeda: elektroforesis gel horizontal dan elektroforesis gel vertikal. Dalam elektroforesis gel horizontal, gel hadir dalam orientasi horizontal dan terendam dalam buffer yang berjalan terus menerus yang ada di dalam kotak gel itu sendiri. Dalam elektroforesis gel vertikal, sistem buffer berorientasi vertikal dan terputus-putus dengan dua ruang yang ada di bagian atas dan bawah dengan katoda dan anoda, masing-masing. Inilah perbedaan utama antara elektroforesis gel horizontal dan vertikal.
Apa itu Elektroforesis Gel Horizontal?
Elektroforesis gel horizontal menggunakan teori dasar untuk pemisahan molekul DNA, RNA atau protein menurut ukuran dan muatan molekulnya masing-masing. Dalam teknik ini, gel hadir dalam orientasi horizontal dan terendam dalam buffer yang kontinu. Gel agarosa digunakan untuk memisahkan kotak gel menjadi dua kompartemen. Salah satu ujung kotak gel berisi anoda sementara ujung lainnya berisi katoda. Ketika arus diterapkan, buffer yang digunakan dalam teknik ini memungkinkan pembuatan gradien muatan. Ketika muatan diterapkan, gel cenderung memanas. Buffer juga berfungsi sebagai pendingin, yang menjaga suhu pada tingkat optimal. Resirkulasi buffer yang berjalan mencegah pembentukan gradien pH. Sistem buffer terputus tidak dapat digunakan dalam elektroforesis gel horizontal karena dua kompartemen sistem gel terhubung dengan buffer berjalan. Akrilamida digunakan selama elektroforesis gel untuk memisahkan campuran protein.
Gambar 01: Elektroforesis Gel Horisontal
Dalam elektroforesis gel horizontal, akrilamida tidak dapat digunakan karena kotak gel terkena oksigen. Karena adanya oksigen, polimerisasi akrilamida terhambat, dan ini mengganggu pembentukan gel. Elektroforesis gel horizontal adalah metode yang mudah digunakan dalam pemisahan DNA dan RNA.
Apa itu Elektroforesis Gel Vertikal?
Teknik elektroforesis gel vertikal berfungsi sesuai dengan teori utama elektroforesis gel, tetapi dianggap lebih kompleks daripada metode elektroforesis gel horizontal. Teknik ini menggunakan buffer yang terputus-putus. Katoda terletak di ruang atas, dan anoda terletak di ruang bawah. Elektroda yang ada di setiap kompartemen menyediakan medan listrik yang dibutuhkan. Lapisan tipis gel dituangkan di antara dua pelat kaca yang dipasang. Oleh karena itu, bagian atas gel terendam di ruang atas, dan bagian bawah gel terendam dalam ruang di bagian bawah. Setelah arus diterapkan, sebagian kecil dari buffer bergerak ke ruang bawah dari ruang atas melalui gel. Arus yang digunakan dalam teknik ini adalah satuan menit.
Gambar 02: Elektroforesis Gel Vertikal
Dalam elektroforesis gel vertikal, buffer hanya mengalir melalui gel. Hal ini memungkinkan kontrol yang akurat dari gradien tegangan selama tahap pemisahan. Gel akrilamida dapat digunakan karena kompartemen tidak terkena oksigen atmosfer. Karena ukuran pori gel akrilamida yang lebih kecil, pemisahan yang tepat dapat dicapai dengan resolusi yang lebih tinggi.
Apa Persamaan Antara Elektroforesis Gel Horizontal dan Vertikal?
- Kedua sistem berfungsi sesuai dengan teori dasar elektroforesis gel.
- Anoda dan katoda digunakan untuk menyediakan medan listrik yang dibutuhkan di kedua sistem.
Apa Perbedaan Elektroforesis Gel Horizontal dan Vertikal?
Elektroforesis Gel Horisontal vs Vertikal |
|
| Elektroforesis Gel Horizontal adalah teknik elektroforesis gel di mana gel hadir dalam orientasi horizontal. | Elektroforesis Gel Vertikal adalah teknik elektroforesis gel dimana gel diorientasikan secara vertikal. |
| Buffer | |
| Elektroforesis gel horizontal terdiri dari buffer kontinu. | Buffer yang berjalan terputus-putus dalam elektroforesis gel vertikal. |
| Penggunaan Akrilamida | |
| Akrilamida tidak dapat digunakan untuk elektroforesis gel horizontal karena kotak gel terkena oksigen atmosfer. | Karena gel tidak terkena oksigen atmosfer karena dua ruang terpisah, akrilamida dapat digunakan untuk elektroforesis gel vertikal. |
| Fungsi | |
| Elektroforesis gel horizontal lebih sering digunakan untuk pemisahan campuran DNA dan RNA tetapi tidak untuk protein. | Elektroforesis gel vertikal digunakan untuk memisahkan campuran protein. |
Ringkasan – Elektroforesis Gel Horizontal vs Vertikal
Gel elektroforesis adalah teknik laboratorium yang banyak digunakan dalam pemisahan campuran yang mengandung molekul DNA, RNA, dan protein. Ada dua metode elektroforesis gel: elektroforesis gel horizontal dan vertikal. Pada elektroforesis gel horizontal, buffer berjalan kontinu sedangkan pada elektroforesis gel vertikal terputus. Inilah perbedaan antara elektroforesis gel horizontal dan vertikal. Kedua sistem berfungsi sesuai dengan prinsip umum elektroforesis gel.
Unduh Versi PDF Elektroforesis Gel Horizontal vs Vertikal
Anda dapat mengunduh versi PDF dari artikel ini dan menggunakannya untuk tujuan offline sesuai catatan kutipan. Silakan unduh versi PDF di sini Perbedaan Antara Elektroforesis Gel Horisontal dan Vertikal.
