Perbedaan utama antara Elisa dan Elispot adalah bahwa Elisa adalah uji imunosorben terkait-enzim yang menentukan konsentrasi total protein pensinyalan yang disekresikan, sedangkan Elispot adalah uji imunosorben terkait-enzim yang mendeteksi sel-sel yang mensekresi sitokin individu.
Elisa dan Elispot adalah dua uji imunosorben terkait-enzim yang banyak digunakan dalam kedokteran, patologi tanaman, bioteknologi, dan berbagai industri farmasi. Dalam teknik ini, analit protein dideteksi oleh antibodi yang ditujukan untuk melawannya. Elisa adalah uji imunosorben terkait-enzim paling populer yang digunakan di laboratorium. Di sisi lain, Elispot adalah uji imunosorben terkait-enzim yang tidak digunakan sebagai pengganti Elisa melainkan digunakan selain Elisa di laboratorium.
Apa itu Elisa Assay?
Elisa adalah uji imunosorben terkait-enzim yang menentukan konsentrasi total protein pensinyalan yang disekresikan. Ini adalah uji biokimia analitik yang banyak digunakan yang pertama kali dijelaskan oleh Engvall dan Perlmann pada tahun 1971. Teknik ini menggunakan jenis fase padat dari enzim immunoassay untuk mendeteksi keberadaan protein spesifik dalam sampel cair menggunakan antibodi yang diarahkan terhadap protein spesifik ini. Tes ini adalah alat diagnostik yang umum digunakan dalam kedokteran, patologi tanaman dan bioteknologi.
Mekanisme Tes ELISA
Pada sebagian besar tes ELISA, jumlah antigen yang tidak diketahui diimobilisasi pada penyangga padat (piring mikroliter) di awal. Kemudian antibodi primer yang cocok diterapkan di atas permukaan pendukung padat. Antibodi ini membentuk kompleks dengan antigen (antigen-antibody complex). Antibodi primer yang terikat antigen dapat dideteksi oleh antibodi sekunder yang dihubungkan dengan enzim melalui biokonjugasi. Pada langkah terakhir uji Elisa, ditambahkan zat yang mengandung substrat enzim. Jika ada pengikatan yang tepat dari antibodi primer ke antigen, perubahan warna yang dapat dideteksi dihasilkan oleh substrat. Pada akhirnya, ini mengkuantifikasi antigen dalam sampel.
Gambar 01: Berbagai Jenis Elisa
Selanjutnya, ada pendekatan yang berbeda untuk Elisa, seperti Elisa langsung dan Elisa tidak langsung. Saat ini, berbagai tes Elisa digunakan untuk mendeteksi patogen manusia seperti Mycobacterium tuberculosis, rotavirus, virus hepatitis B, virus hepatitis C, E.coli penghasil enterotoksin, HIV, dan SARS-CoV-2.
Apa itu Elispot Assay?
Elispot adalah uji imunosorben terkait-enzim yang mendeteksi sel-sel yang mensekresi sitokin individu. Cecil Czerkinsky pertama kali mendeskripsikan ELISpot pada tahun 1983. Ini adalah jenis pengujian yang berfokus pada pengukuran kuantitatif frekuensi sekresi sitokin untuk satu sel. Ini juga diklasifikasikan sebagai teknik yang menggunakan antibodi untuk mendeteksi analit protein biologis atau kimia. Uji fluorospot adalah variasi dari uji Elispot, yang menggunakan fluoresensi untuk menganalisis beberapa analit (protein yang lebih rahasia).
Mekanisme Uji Elispot
Dalam mekanisme ini, antibodi monoklonal spesifik sitokin ditambahkan ke lubang pelat mikroliter pada awalnya. Kemudian sel-sel yang diinginkan yang diamati ditambahkan ke sumur. Kemudian, sel-sel diinkubasi. Selama inkubasi sel, sel dibiarkan bereaksi terhadap rangsangan apapun dan mengeluarkan sitokin. Sitokin yang telah disekresikan oleh sel yang diinkubasi akan menempel pada antibodi karena sel dikelilingi oleh antibodi monoklonal spesifik sitokin.
Gambar 02: Elispot Assay
Untuk mendeteksi antibodi monoklonal spesifik sitokin ini, antibodi deteksi spesifik terbiotinilasi ditambahkan ke sumur. Antibodi deteksi spesifik terbiotinilasi menangkap antibodi monoklonal spesifik sitokin di dalam sumur. Selain itu, konjugat streptavidin-enzim ditambahkan ke sumur untuk mengikat dengan antibodi deteksi. Pada langkah terakhir, substrat spesifik ditambahkan ke sumur. Reaksi konjugat enzim dan substrat menghasilkan bintik-bintik yang berbeda di sumur. Titik-titik berbeda ini dibaca pada pembaca ELISpot otomatis. Pada akhirnya, ini akan menghitung lebih lanjut frekuensi sekresi sitokin.
Apa Persamaan Elisa dan Elispot?
- Keduanya adalah uji imunosorben terkait-enzim.
- Kedua tes mendeteksi analit protein spesifik.
- Tes ini menggunakan antibodi spesifik untuk mengidentifikasi analit protein.
- Kedua pengujian menggunakan enzim dan substrat.
- Mereka digunakan sebagai alat diagnostik di laboratorium medis.
Apa Perbedaan Elisa dan Elispot?
Elisa adalah uji imunosorben terkait-enzim yang menentukan konsentrasi total protein pensinyalan yang disekresikan. Di sisi lain, Elispot adalah uji imunosorben terkait-enzim yang mengukur sel-sel yang mensekresi sitokin individu. Jadi, inilah perbedaan utama antara Elisa dan Elispot. Selain itu, pada uji Elisa, antigen terlebih dahulu diimobilisasi ke dalam sumur mikroliter. Sebaliknya, pada uji Elispot, antibodi pertama-tama diimobilisasi ke dalam sumur mikroliter. Jadi, inilah perbedaan lain antara Elisa dan Elispot.
Infografik di bawah ini menyajikan analisis terperinci tentang perbedaan antara Elisa dan Elispot dalam bentuk tabel.
Ringkasan – Elisa vs Elispot
Elisa dan Elispot adalah dua uji imunosorben terkait-enzim yang banyak digunakan dalam kedokteran, patologi tanaman, bioteknologi, dan berbagai industri farmasi. Elisa mendeteksi adanya ligan (protein) dalam sampel cairan menggunakan antibodi yang diarahkan terhadap ligan yang akan diukur. Elispot assay adalah metode yang banyak digunakan untuk memantau respon imun. Ini mendeteksi sel-sel yang mensekresi sitokin individu menggunakan antibodi. Ini adalah teknik immunoassay dan bioassay. Demikian ringkasan perbedaan Elisa dan Elispot.
