Perbedaan utama antara probe radioaktif dan nonradioaktif adalah bahwa probe radioaktif adalah sekuens DNA atau RNA untai tunggal yang diberi label dengan isotop radioaktif sedangkan probe nonradioaktif adalah sekuens DNA atau RNA untai tunggal yang diberi label dengan tag kimia atau tag berpendar.
Hibridisasi asam nukleat adalah teknik penting dalam biologi molekuler, terutama dalam diagnosis mikroba. Ini membantu untuk mengidentifikasi atau mendeteksi urutan asam nukleat tertentu. Dalam teknik ini, asam nukleat difiksasi ke permukaan padat dan dihibridisasi dengan probe. Probe adalah fragmen DNA atau RNA yang melengkapi urutan yang diinginkan. Jika urutan target ada dalam sampel, probe akan berhibridisasi dengannya dan membuatnya dapat dideteksi. Ada dua jenis probe sebagai probe radioaktif dan nonradioaktif. Oleh karena itu, kita dapat menandai probe dengan tag radioaktif atau tag fluorescent.
Apa itu Probe Radioaktif?
Probe radioaktif adalah fragmen DNA atau RNA untai tunggal dengan tag radioaktif. Radioisotop digunakan dalam mempersiapkan probe radioaktif. Radioisotop 32P, 33P dan 35S biasanya digunakan dalam pelabelan probe. Selain itu, radioisotop 3H dan 1251 juga digunakan pada tingkat yang lebih rendah dalam pelabelan probe. Tetapi mereka digunakan untuk aplikasi tertentu. Di antara radioisotop yang berbeda, 32P adalah isotop yang paling umum digunakan dalam pelabelan probe radioaktif.
Probe radioaktif memberikan tingkat keandalan dan spesifisitas yang lebih tinggi. Oleh karena itu, mereka memberikan sensitivitas maksimum dan memungkinkan kuantifikasi akurat dari urutan target. Namun, ada beberapa kelemahan yang terkait dengan probe radioaktif. Mereka memiliki waktu paruh yang pendek. Selain itu, mereka berbahaya dan produksi, penggunaan dan pembuangan bermasalah saat penanganan. Selain itu, persiapan probe radioaktif adalah proses yang mahal. Oleh karena itu, karena masalah keamanan dan biaya, saat ini probe radioaktif tidak digunakan sebagai probe nonradioaktif.
Apa itu Probe Nonradioaktif?
Probe nonradioaktif adalah jenis probe kedua yang diberi label kimia. Digoxigenin adalah probe nonradioaktif, yang merupakan penanda berbasis antibodi. Probe digoxigenin bersifat spesifik dan sensitif. Biotin adalah label lain yang digunakan dalam persiapan probe nonradioaktif. Sistem deteksi biotin/Streptavidin dan Digoxigenin/Antibody adalah probe nonradioaktif yang paling umum digunakan dalam hibridisasi. Selanjutnya, sistem peroksidase lobak adalah sistem probe nonradioaktif lainnya. Setelah probe nonradioaktif ini dihibridisasi dengan urutan target, mereka dapat dideteksi melalui autoradiografi atau teknik pencitraan lainnya.
Gambar 01: Hibridisasi dengan Probe Nonradioaktif
Probe nonradioaktif lebih sering digunakan dalam hibridisasi asam nukleat daripada probe radioaktif. Ini karena probe nonradioaktif tidak terkait dengan bahan berbahaya. Selanjutnya, metode deteksi nonradioaktif memerlukan waktu pemaparan yang lebih pendek untuk mendeteksi sinyal hibridisasi. Namun, langkah-langkah yang terlibat dalam hibridisasi DNA dengan probe nonradioaktif biasanya membosankan dan memakan waktu. Selain itu, solusi yang tersedia secara komersial mahal.
Apa Persamaan Antara Probe Radioaktif dan Nonradioaktif?
- Probe radioaktif dan nonradioaktif adalah dua jenis probe yang digunakan dalam hibridisasi asam nukleat.
- Mereka memfasilitasi deteksi urutan target dalam sampel.
- Kedua jenis probe sama sensitif dan spesifiknya.
Apa Perbedaan Antara Probe Radioaktif dan Nonradioaktif?
Probe radioaktif adalah urutan DNA atau RNA untai tunggal yang diberi label dengan isotop radioaktif, sedangkan probe nonradioaktif adalah urutan DNA atau RNA untai tunggal yang diberi label dengan label kimia. Jadi, inilah perbedaan utama antara probe radioaktif dan nonradioaktif. Juga, isotop radioaktif berbahaya. Oleh karena itu, probe radioaktif sangat berbahaya, sedangkan probe nonradioaktif tidak berbahaya.
Selain itu, perbedaan lain antara probe radioaktif dan nonradioaktif adalah kekurangannya. Waktu paruh yang pendek dan bahaya yang terkait dengan produksi, penggunaan, dan pembuangannya adalah kerugian menggunakan probe radioaktif. Di sisi lain, langkah-langkah yang terlibat dalam hibridisasi DNA dengan probe nonradioaktif biasanya membosankan dan memakan waktu.
Infografik di bawah ini menunjukkan lebih banyak perbandingan terkait perbedaan antara probe radioaktif dan nonradioaktif.
Ringkasan – Probe Radioaktif vs Nonradioaktif
Probe adalah fragmen DNA atau RNA yang mengandung urutan nukleotida yang melengkapi urutan yang diinginkan. Untuk mendeteksi urutan target, probe dapat diberi label radioaktif, fluoresensi atau kimia. Probe mengikat dengan urutan komplementer dalam sampel. Probe radioaktif diberi label dengan isotop radioaktif sedangkan probe nonradioaktif diberi label dengan biotin, digoxigenin atau peroksidase lobak. Jadi, inilah perbedaan utama antara probe radioaktif dan nonradioaktif.
