Perbedaan Kunci – Kloning vs Subkloning
Kloning dan Subkloning adalah prosedur biologi molekuler yang membuat sel atau organisme identik secara genetik yang membawa DNA atau gen yang diinginkan. Kloning adalah teknik yang melibatkan penyisipan gen atau DNA yang tertarik ke dalam vektor, replikasinya di dalam bakteri inang, dan produksi sel atau organisme yang merupakan salinan persis dari susunan genetik. Subkloning adalah teknik yang melibatkan penyisipan gen yang diinginkan, yang sudah dimasukkan ke dalam vektor, ke dalam vektor sekunder, replikasinya di dalam bakteri inang, dan produksi salinan sel atau organisme yang identik secara genetik. Perbedaan utama antara kloning dan subkloning adalah bahwa, dalam kloning, gen yang diinginkan, setelah diligasi menjadi vektor, melanjutkan proses kloning sementara, dalam subkloning, gen yang sudah dikloning dipisahkan dari vektor induk dan dimasukkan lagi ke dalam vektor penerima dan lanjutkan prosesnya.
Apa itu Kloning?
Kloning adalah prosedur yang menghasilkan organisme atau sel yang identik secara genetik. Di alam, kloning terjadi dengan cara reproduksi aseksual. Ketika tidak ada rekombinasi atau perubahan genetik, sel anak menerima susunan genetik yang sama dari induknya. Organisme prokariotik dan eukariotik membuat klon dengan pembelahan biner, tunas, mitosis, dll. Dalam biologi molekuler, kloning gen atau fragmen DNA tertentu adalah metode populer untuk mempelajari struktur dan fungsi bagian DNA tertentu.
Tujuan utama kloning molekuler adalah untuk membuat jutaan salinan sel atau organisme yang identik secara genetik yang mengandung fragmen DNA yang diinginkan (terutama gen). Ini menciptakan organisme dengan salinan genetik yang tepat dari yang lain. Terutama, gen spesifik dikloning dalam studi molekuler untuk mendapatkan informasi struktural dan fungsional dan untuk pengurutan DNA. Juga, untuk produksi protein atau produk tertentu dalam skala besar, kloning banyak digunakan.
Prosedur Kloning
Langkah dasar prosedur kloning adalah sebagai berikut.
- Identifikasi dan isolasi gen yang diinginkan. (Amplifikasi gen yang diinginkan dengan PCR).
- Restriksi pencernaan Gen yang diinginkan (Restriksi endonuklease memotong gen).
- Pembatasan pencernaan DNA vektor. (DNA vektor juga dipotong menggunakan endonuklease restriksi yang sama).
- Penyisipan gen ke dalam vektor dan pembentukan molekul rekombinan.
- Transformasi vektor rekombinan menjadi bakteri inang.
- Isolasi dan identifikasi bakteri yang diubah (vektor plasmid harus mengandung gen yang dapat dipilih, paling sering gen resistensi antibiotik untuk menyaring bakteri yang diubah).
- Ekspresi gen rekombinan dalam inang.
Gambar_01: Prosedur Kloning
Apa itu Subkloning?
Subkloning adalah prosedur memindahkan gen yang diinginkan dari satu vektor ke vektor lain untuk melihat ekspresi gen untuk mendapatkan fungsi gen yang diinginkan. Dalam metode ini, dua vektor dilibatkan; yaitu, vektor induk dan vektor tujuan. Sisipan kloning dipindahkan lagi ke vektor kedua dalam subkloning. Tujuan mentransfer gen dari vektor pertama ke vektor kedua adalah untuk mendapatkan sesuatu yang tidak dapat dilakukan oleh vektor pertama atau untuk memisahkan gen lagi dalam fragmen DNA yang sudah dikloning dan mengekspresikannya sendiri. Enzim restriksi digunakan dalam prosedur ini di awal.
Prosedur Subkloning
Langkah dasar subcloning adalah sebagai berikut.
- Dengan bantuan endonuklease restriksi, pemisahan DNA yang diinginkan pada plasmid donor (vektor induk).
- Amplifikasi DNA yang diinginkan menggunakan PCR.
- Pemurnian produk PCR (DNA yang diinginkan) dengan elektroforesis gel.
- Pembukaan plasmid penerima oleh endonuklease restriksi yang sama yang digunakan untuk memisahkan DNA yang diinginkan dalam plasmid induk.
- Ligasi DNA yang diinginkan (gen) ke dalam plasmid penerima untuk membuat plasmid subklon.
- Transformasi vektor subklon menjadi bakteri inang yang kompeten.
- Pemutaran sel yang diubah.
- Pemurnian DNA plasmid dan digunakan untuk pengurutan DNA atau ekspresi gen untuk mendapatkan produk yang diinginkan.
Subkloning dilakukan pada saat mengisolasi satu gen dari kelompok gen kloning atau ketika gen yang diinginkan diperlukan untuk mentransfer ke plasmid yang berguna untuk melihat fungsi yang tepat dari gen yang diinginkan.
Gambar_02: Prosedur Subkloning
Apa perbedaan antara Kloning dan Subkloning?
Kloning vs Subkloning |
|
| Kloning adalah prosedur yang menghasilkan organisme atau sel yang identik secara genetik. | Subkloning adalah prosedur memindahkan gen yang diinginkan dari satu vektor ke vektor lain untuk melihat ekspresi gen untuk mendapatkan fungsi gen yang diinginkan. |
| Proses | |
| Pisahkan DNA yang diinginkan dari organisme dan dimasukkan ke dalam vektor satu kali dan kloning | DNA yang sudah diklon dipisahkan dari vektor pertama dan dimasukkan ke dalam vektor kedua dan dikloning. |
| Sisipkan Gerakan melalui Vektor | |
| Tidak memindahkan sisipan (DNA yang diinginkan) dari satu vektor ke vektor lain. | Memindahkan sisipan dari vektor induk ke vektor tujuan. |
Ringkasan – Kloning vs Subkloning
Kloning menciptakan sel atau organisme yang identik secara genetik dengan gen atau DNA yang disisipkan. Ini berlangsung melalui pemisahan dan penyisipan DNA yang diinginkan ke dalam vektor dan ekspresi di dalam bakteri inang. Subcloning berbagi langkah yang sama dengan kloning. Namun, dalam subkloning, fragmen DNA yang sudah dikloning (gen yang diinginkan) dimasukkan ke dalam vektor dan diubah menjadi bakteri inang. Itulah perbedaan utama antara kloning dan subkloning.
