PCR vs Real-time PCR
PCR atau reaksi berantai Polimerase adalah penemuan revolusioner dalam biologi molekuler modern, yang pertama kali dikembangkan oleh ahli kimia Kary Mullis pada tahun 1983. Hal ini memungkinkan sekuens tunggal dalam DNA kompleks untuk diamplifikasi untuk analisis. Ide dasar dari PCR adalah bahwa dua primer, yang melengkapi untai berlawanan dari urutan DNA, berorientasi satu sama lain; primer menghasilkan untai komplementer, masing-masing mengandung primer lainnya. Oleh karena itu, hasilnya adalah sejumlah besar urutan yang sesuai dengan DNA yang terletak di antara dua primer. Enzim DNA polimerase digunakan untuk memperpanjang primer dalam PCR. DNA polimerase adalah enzim termostabil, dan memiliki kemampuan untuk bertahan pada suhu tinggi (94 hingga 95 °C) yang digunakan untuk denaturasi DNA cetakan.
PCR melibatkan tiga langkah, yaitu, putaran berulang denaturasi, anil primer, dan sintesis DNA. Sebuah mesin thermocycler digunakan untuk melakukan reaksi ini sehingga dapat diprogram untuk mengubah suhu dengan cepat dan akurat. Aplikasi PCR adalah investigasi kriminal, sidik jari DNA, deteksi patogen, dan analisis DNA spesies manusia purba.
Apa itu PCR Konvensional?
Ada tiga tahapan utama PCR konvensional, yaitu; Tahap amplifikasi DNA, pemisahan PCR, dan deteksi produk. Pemisahan segmen DNA biasanya dilakukan dengan elektroforesis gel agarosa. Produk kemudian diwarnai dengan etheiduim bromide. Akhirnya, deteksi dicapai dengan visualisasi pita ke gel di bawah sinar UV. Oleh karena itu, hasil akhir PCR konvensional tidak dinyatakan sebagai angka. Biasanya PCR konvensional hanya dapat mendeteksi satu parameter saja.
Apa itu Real-time PCR?
PCR waktu nyata dapat mendeteksi amplifikasi produk, saat produk disintesis. Dengan berkembangnya teknologi, PCR menjadi teknik yang sangat populer, terutama untuk deteksi dan identifikasi bakteri pada makanan. PCR real-time menggunakan sistem fluorescent dye dan thermocycler yang dilengkapi dengan kemampuan deteksi fluorescent.
Apa perbedaan antara PCR Konvensional dan PCR Real-time?
• PCR konvensional lebih memakan waktu karena menggunakan elektroforesis gel untuk menganalisis produk PCR yang diperkuat. Sebaliknya, PCR real-time memakan waktu lebih sedikit karena dapat mendeteksi amplifikasi selama fase awal reaksi.
• Real-time PCR mengumpulkan data pada fase pertumbuhan eksponensial PCR sementara PCR tradisional mengumpulkan data pada Titik akhir reaksi.
• Hasil titik akhir PCR konvensional mungkin tidak terlalu tepat, tetapi hasil PCR real-time sangat tepat.
• Real-time PCR lebih sensitif dibandingkan PCR konvensional.
• PCR konvensional memiliki resolusi yang sangat buruk sedangkan PCR real-time dapat mendeteksi perubahan yang sangat sedikit karena resolusi yang tinggi.
• Deteksi titik akhir PCR konvensional memiliki rentang dinamis yang pendek sedangkan deteksi PCR real-time memiliki rentang dinamis yang lebar.
• Tidak seperti PCR konvensional, teknik deteksi otomatis ditemukan dalam PCR waktu nyata.
• PCR konvensional sangat canggih dan padat karya daripada PCR real-time.
• Tidak seperti PCR real-time, PCR konvensional tidak dapat membedakan antara bakteri hidup dan mati.
• Real-time PCR menggunakan sistem pewarna fluoresen untuk mendeteksi produk sedangkan PCR konvensional menggunakan etidium bromida dan sinar UV untuk memvisualisasikan pita dalam media gel agarosa.
